Caracterización de las especies Ralstonia solanacearum, R. pseudosolanacearum y R. syzygii en las principales zonas productoras de tomate (Solanum lycopersicum) en Costa Rica y verificación de la patogenicidad

Abstract

La investigación se centró en la caracterización fenotípica y molecular de las especies del Complejo de Especies de Ralstonia spp., las cuales se asocian con el síntoma de la marchitez bacteriana en tomate, una enfermedad de importancia agrícola para el cultivo. Por lo cual es necesario identificar y comprender la diversidad y la patogenicidad de las especies para desarrollar estrategias efectivas de manejo de la enfermedad. Se realizó la colecta de 77 plantas sintomáticas por marchitez bacteriana en 25 puntos de muestreo distribuidos en 17 fincas, de las cuales se colectaron 33 plantas en la provincia de Alajuela, 22 en Cartago, ocho en Heredia y 10 en San José, además de otras cuatro de un área desconocida porque el productor no brindó los datos exactos de la ubicación. El tejido sintomático de cada planta se aisló en medio de cultivo de TZC (por sus siglas en inglés Triphenyl-Tetrazolium Chloride) (Kelman, 1954); donde se analizó el morfotipo en términos de morfología (pigmentación, forma y consistencia), así como la identidad molecular de los aislamientos para las especies del RSSC (Complejo de Especies de Ralstonia solanacearum) con base en los cebadores del gen 16S rADN (Seal et al., 1993) específicos para el género y los que amplifican la región ITS para la diferenciación de especies y filotipos (Prior & Fegan, 2005a), según ubicación de muestreo. Posteriormente, se realizó la prueba de patogenicidad con la especie R. pseudosolanacearum- filotipo I en híbridos de tomate con diferente nivel de resistencia reportada. Sólo 58 morfotipos fueron positivos para RSSC a partir de 91 morfotipos bacilos Gram negativos aislados, donde los morfotipos positivos para Ralstonia spp. tenían diversidad fenotípica. De acuerdo con lo reportado en la literatura para el medio TZC (Nurdika et al., 2022), 27.59% fueron caracterizados como virulentos con un color rojo o rosado y un borde amplio color blanco y consistencia fluida o mucoide, a diferencia de los morfotipos avirulentos (27.59%) que tienden a ser redondos, pequeños y completamente rojos. Con base en la identificación molecular se registró R. pseudosolanacearum- filotipo I en las cuatro provincias muestreadas, R. solanacearum- filotipo II en Alajuela, Cartago y Heredia, y un posible R. syzygii – filotipo IV en Heredia. Con base en las pruebas de patogenicidad se observó que híbridos de tomate con diferente nivel de resistencia pueden verse afectados por la marchitez bacteriana, aunque al no haber diferencias significativas, no se puede ser concluyente acerca del grado de afectación. Con lo cual se concluye que hay alta variabilidad fenotípica en la identificación de Ralstonia spp. a nivel de cultivo utilizando el medio TZC, diferente a lo que reporta la literatura. Se confirma la existencia de R. pseudosolanacearum- filotipo I y R. solanacearum- filotipo II en las zonas muestreadas. En cuanto a la presencia de R. syzygii– filotipo IV como posible nuevo hallazgo, el resultado debe ser confirmado por secuenciación del genoma bacteriano completo. En relación con las pruebas de inoculación, al no tener resultados concluyentes, es necesario que en un futuro se repliquen con aislamientos de bacterias frescas que no hayan perdido la virulencia.