Optimización de la expresión de la metaloproteinasa recombinante BaP1 en Pichia pastoris

Abstract

La proteína BaP1 es una metaloproteinasa de la clase P1 del veneno de la serpiente Bothrops asper, la cual contribuye al daño tisular local al inducir inflamación, alteraciones de la matriz extracelular, mionecrosis, dermonecrosis y hemorragia local. La tecnología de ADN recombinante supone una herramienta para realizar modificaciones en su secuencia codificante de proteínas y así estudiar las relaciones entre su estructura y función. El sistema de expresión en la levadura Pichia pastoris es una alternativa rápida, poco costosa, de fácil cultivo, con disponibilidad comercial y capaz de altos niveles de proteínas expresadas con apropiadas modificaciones postraduccionales. En el presente trabajo se optimizó la cepa de Pichia pastoris, la temperatura y el pH de expresión; hallando un mayor rendimiento en la cepa KM71H que presenta un metabolismo lento del metanol (MutS) y utilizando un pH de 6. Variaciones en la temperatura permiten diferentes patrones de corte, encontrándose un predominio de la proenzima a 20°C y un predominio de la enzima madura a 30°C.