Validación de la técnica QF-PCR para el diagnóstico de cromosomopatías en Costa Rica

Abstract

Introducción. Las cromosomopatías autosómicas más frecuentes son las trisomías de los cromosomas 21, 18 y 13. En Costa Rica, el diagnóstico de anomalías cromosómicas fetales y neonatales se realiza solo mediante el análisis citogenético convencional de cromosomas obtenidos de cultivos celulares, tanto de amniocitos como de linfocitos de sangres fetales y neonatales. Además de que la espera por los resultados puede ser larga, con alguna frecuencia fracasa el cultivo por contaminación o mala calidad de la muestra o las figuras mitóticas no se pueden analizar. La QF-PCR permite el diagnóstico fiable y rápido de cromosomopatías mediante la amplificación de STRs específicos para cada cromosoma en una PCR fluorescente y su posterior análisis en un secuenciador genético. Esta técnica ha sido validada en varios laboratorios europeos y en los Estados Unidos, y ha demostrado ser un excelente complemento del análisis citogenético convencional, por lo que sería muy valioso contar con la QF-PCR en Costa Rica. Objetivo. Validar la QF-PCR para el diagnóstico prenatal y posnatal de aneuploidías de los cromosomas 21, 18 y 13. Metodología. Se diseñaron tres PCRs multiplex para amplificar cuatro distintos STRs de cada uno de los cromosomas 21, 18 y 13. Se colectaron 129 muestras entre líquidos amnióticos, sangres fetales y neonatales y restos de abortos espontáneos, llegadas al INISA entre el 2006 y el 2008 con solicitud de análisis cromosómico. Los datos de la QF-PCR fueron comparados con los resultados del análisis cromosómico convencional. Se calcularon los parámetros de sensibilidad, especificidad y valores predictivos positivos y negativos para validar la técnica. Resultados. La sensibilidad, especificidad, valor predictivo positivo y valor predictivo negativo fueron 96%, 100%, 100% y 98% respectivamente. La QF-PCR identificó correctamente todas las aneuploidías de los cromosomas 21 (n= 20) y 18 (n=6), así como a todos los individuos sin cromosomopatía. Sin embargo, no se identificó un mosaico, mos 47,XX +13/46,XX, el cual se diagnosticó como libre de cromosomopatía. No se pudo obtener el cariotipo en el 24% de las muestras, por fracaso en el cultivo o ausencia de figuras mitóticas analizables. Se logró realizar al análisis de STRs en el 77% de las muestras en las que no se pudo realizar el cultivo celular, en todos los tipos de muestras colectadas. No hubo falsos positivos. Los marcadores STRs utilizados mostraron diferencias en los porcentajes de heterocigosis con respecto a los utilizados como referencia, pero no hubo muestras no informativas para todos los STRs. Conclusión. La QF-PCR demostró ser una metodología sencilla, fiable y rápida, por lo que podría convertirse en una herramienta complementaria del análisis cromosómico convencional. La obtención de resultados rápidos en casos de diagnóstico prenatal podría disminuir el período de ansiedad parental por la espera de los resultados, así como permitir un mejor abordaje terapéutico de los fetos afectados. Se recomienda hacer análisis con más marcadores para los cromosomas 21, 18 y 13, como e incluir además los cromosomas X y Y, y así permitir el diagnóstico de aneuploidías en los cromosomas sexuales.