REVISTA MÉDICA DE LA UNIVERSIDAD DE COSTA RICA Volumen 11, Número 2, Artículo ISSN: 1659-2441 Revista electrónica publicada por el Departamento d Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com ARTÍCULO DE INVESTIGACIÓN EFECTO DEL EXTRACTO ACUOSO platypus (Hemsl.) Fritsh. SOBRE LA PROTECCIÓN GÁSTRICA Y LA MOTILIDAD GASTROINTESTINAL Orozco Aguilar, Josué 1,2; Chavarría Rojas, Marianela 4,5; Cordero García, Eugenia 1; Morales Acuña, Juan Alberto Sara. 2,8 1 Facultad de Farmacia, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. 2 Laboratorio de Ensayos Biológicos, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. 3 Escuela de Farmacia, Universidad Latina de Costa Rica. 4 Centro de Investigaciones en Estructuras Microscópicas, Un 5 Escuela de Biología, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. 6 Servicio de Patología, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional, Costa Rica. 7 Escuela de Nutrición, Facultad de Medicina, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. 8 Departamento de Fisiología, Escuela de Medicina, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. Resumen: Licania platypus se distribuye ampliamente en países tropicales. Tradicionalmente, en América Central se ha utilizado para diversos problemas de salud, especialmente gastrointestinales. Objetivo: Investigar la actividad antiulcerosa extracto acuoso de hojas de Licania platypus Métodos: El daño gástrico fue inducido con los modelos de etanol e indometacina y se evaluaron otros parámetros en el modelo de ligadura pilórica. utilizando rojo de fenol. Resultados: La administración oral del extracto acuoso (1000 mg/kg) redujo significativamente el área d lesiones gástricas (p < 0,05) en ambos modelos. Se obser gástricas y en la secreción de moco gástrico, además de disminución en la acidez total y en lipídica (p < 0,05). El extracto acuoso de mostrar efecto alguno sobre el tránsito intestinal. Conclusión: El extracto acuoso de Licania platypus inducción de úlceras agudas y una disminución en el vaciamiento gástrico. Las activ este estudio contribuyen con el conocimiento etnofarmacológico atribuido a Palabras clave: antiulcerosos, motilidad gastrointestinal, prostaglandinas, moco, antioxidantes. Fuente: CeCS, BIREME. Recibido: 30 Junio 2017. Aceptado: 20 Septiembre REVISTA MÉDICA DE LA UNIVERSIDAD DE COSTA RICA , Artículo 2 Octubre 2017–ABRIL 2018 Publicación semestral www.revistamedica.ucr.ac.cr Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 INVESTIGACIÓN EXTRACTO ACUOSO DE HOJAS DE sl.) Fritsh. SOBRE LA PROTECCIÓN GÁSTRICA Y LA MOTILIDAD GASTROINTESTINAL ; Chavarría Rojas, Marianela 2,3; Sandí Flores, Jennifer ; Morales Acuña, Juan Alberto 6; Retana Salazar, Axel Facultad de Farmacia, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. Laboratorio de Ensayos Biológicos, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. Escuela de Farmacia, Universidad Latina de Costa Rica. Centro de Investigaciones en Estructuras Microscópicas, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. Escuela de Biología, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. Servicio de Patología, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional, Costa Rica. Medicina, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. Departamento de Fisiología, Escuela de Medicina, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. se distribuye ampliamente en países tropicales. Tradicionalmente, en América Central se ha utilizado para diversos problemas de salud, especialmente gastrointestinales. actividad antiulcerosa gástrica y el efecto sobre la motilidad gastrointestinal del Licania platypus. Métodos: El daño gástrico fue inducido con los modelos de etanol e indometacina y se evaluaron otros parámetros en el modelo de ligadura pilórica. Además, se analizó el efecto sobre la motilidad gastrointestinal Resultados: La administración oral del extracto acuoso (1000 mg/kg) redujo significativamente el área d 05) en ambos modelos. Se observó un incremento en el volumen de gástricas y en la secreción de moco gástrico, además de disminución en la acidez total y en 05). El extracto acuoso de Licania platypus redujo la tasa de vaciamiento gástrico (p < 0 mostrar efecto alguno sobre el tránsito intestinal. Licania platypus brinda un efecto gastroprotector en diferentes modelos de inducción de úlceras agudas y una disminución en el vaciamiento gástrico. Las activ este estudio contribuyen con el conocimiento etnofarmacológico atribuido a Licania platypus ntiulcerosos, motilidad gastrointestinal, prostaglandinas, moco, antioxidantes. Septiembre 2017. Publicado: 25 Octubre 2017. REVISTA MÉDICA DE LA UNIVERSIDAD DE COSTA RICA 2018 www.revistamedica.ucr.ac.cr e Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 10 11-4489. DE HOJAS DE Licania sl.) Fritsh. SOBRE LA PROTECCIÓN GÁSTRICA Y LA MOTILIDAD GASTROINTESTINAL. Sandí Flores, Jennifer 1; Alvarado Barboza, Gilbert ; Retana Salazar, Axel 4,7 y González Camacho, iversidad de Costa Rica, Costa Rica. Escuela de Biología, Facultad de Ciencias Exactas, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. Servicio de Patología, Escuela de Medicina Veterinaria, Universidad Nacional, Costa Rica. Departamento de Fisiología, Escuela de Medicina, Universidad de Costa Rica, Costa Rica. se distribuye ampliamente en países tropicales. Tradicionalmente, en América Central se ha utilizado para diversos problemas de salud, especialmente gastrointestinales. gástrica y el efecto sobre la motilidad gastrointestinal del Métodos: El daño gástrico fue inducido con los modelos de etanol e indometacina y se evaluaron otros se analizó el efecto sobre la motilidad gastrointestinal Resultados: La administración oral del extracto acuoso (1000 mg/kg) redujo significativamente el área de las incremento en el volumen de las secreciones gástricas y en la secreción de moco gástrico, además de disminución en la acidez total y en la peroxidación redujo la tasa de vaciamiento gástrico (p < 0,05) sin brinda un efecto gastroprotector en diferentes modelos de inducción de úlceras agudas y una disminución en el vaciamiento gástrico. Las actividades demostradas en Licania platypus. ntiulcerosos, motilidad gastrointestinal, prostaglandinas, moco, antioxidantes. Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com EFFECT OF LEAVES platypus (Hemsl.) Fritsch. GASTROINTESTINAL MOTILITY Abstract: Licania platypus is a species widely distributed in tropical countries. Traditionally, it has been used in Central America for a variety of health problems, especially gastrointestinal problems. Aim: To investigate gastric antiulcer activity and gastrointestinal motility aqueous extract. Methods: Gastric lesions were induced by ethanol and indomethacin models; also other parameters were analyzed in pylorus-ligated model. Furthermore, was evaluated the effect on gastrointestinal motility phenol red. Results: Oral administration of aqueous extract (1000 mg/kg) significantly reduced the (p < 0,05) on both models. It was observed a significantly increased the gastric secretion volume and gastric mucus, whereas decreased total acidit platypus reduced the rate of gastric emptying (p < 0, Conclusion: Licania platypus aqueous extract has a gastrop models and reducing the rate of gastric emptying. The activities proved in this study contribute ethnopharmacological toxicological knowledge attributed to Key words: anti-ulcer agents, gastrointestinal motility, prostaglandins, mocus, antioxidants. Source: CeCS, BIREME. Abreviaturas: AU: área de ulceración EALp: extracto acuoso de Licania platypus EtOH: etanol H&E: hematoxilina-eosina IP: índice de prevención MDA: malondialdehído RAN: ranitidina SUC: sucralfato INTRODUCCION La mucosa gástrica está continuamente expuesta a factores corrosivos, tales como ácido clorhídrico, pepsina, especies reactivas de oxígeno, consumo de alcohol, exposición a antiinflamatorios no esteroideos y el fumado [1, 2, 3]. Una úlcera péptica se entiende como una lesión de carácter crónico y recurrente que se caracteriza por la pérdida de integridad y presencia de un proceso inflamatorio en la mucosa gástrica o intestinal [4, 5, 6]. La fisiopatología de las úlceras gástricas se Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 LEAVES AQUEOUS EXTRACT Fritsch. ON GASTROPROTECTION AND GASTROINTESTINAL MOTILITY. is a species widely distributed in tropical countries. Traditionally, it has been used in Central America for a variety of health problems, especially gastrointestinal problems. Aim: To investigate gastric antiulcer activity and gastrointestinal motility effect of Methods: Gastric lesions were induced by ethanol and indomethacin models; also other parameters were ligated model. Furthermore, was evaluated the effect on gastrointestinal motility Results: Oral administration of aqueous extract (1000 mg/kg) significantly reduced the 05) on both models. It was observed a significantly increased the gastric secretion volume and gastric ecreased total acidity and lipid peroxidation (p < 0,05). The aqueous extract of rate of gastric emptying (p < 0,05), but did not show any effect on intestinal transit. aqueous extract has a gastroprotective effect in different acute ulcer induction models and reducing the rate of gastric emptying. The activities proved in this study contribute ethnopharmacological toxicological knowledge attributed to Licania platypus. ulcer agents, gastrointestinal motility, prostaglandins, mocus, antioxidants. Licania platypus La mucosa gástrica está continuamente expuesta a factores corrosivos, tales como ácido clorhídrico, pepsina, especies reactivas de oxígeno, consumo de alcohol, exposición a antiinflamatorios no esteroideos y el fumado [1, 2, 3]. Una úlcera iende como una lesión de carácter crónico y recurrente que se caracteriza por la pérdida de integridad y presencia de un proceso inflamatorio en la mucosa gástrica o intestinal [4, 5, 6]. La fisiopatología de las úlceras gástricas se atribuye al desbalance corrosivos y los mecanismos de gastroprotección de la mucosa gástrica, los cuales incluyen una adecuada motilidad gastrointestinal y perfusión gástrica, una barrera de moco continua e intacta y mediadores bioquímicos como las prostaglan y el óxido nítrico [7, 8]. Una motilidad gastrointestinal incrementada podría promover la protección gástrica al acelerar el vaciamiento gástrico de aquellos agentes , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 11 11-4489. AQUEOUS EXTRACT OF Licania ON GASTROPROTECTION AND is a species widely distributed in tropical countries. Traditionally, it has been used in Central America for a variety of health problems, especially gastrointestinal problems. effect of Licania platypus leaves Methods: Gastric lesions were induced by ethanol and indomethacin models; also other parameters were ligated model. Furthermore, was evaluated the effect on gastrointestinal motility using Results: Oral administration of aqueous extract (1000 mg/kg) significantly reduced the area of gastric lesions 05) on both models. It was observed a significantly increased the gastric secretion volume and gastric 05). The aqueous extract of Licania 05), but did not show any effect on intestinal transit. rotective effect in different acute ulcer induction models and reducing the rate of gastric emptying. The activities proved in this study contribute ulcer agents, gastrointestinal motility, prostaglandins, mocus, antioxidants. atribuye al desbalance entre los factores corrosivos y los mecanismos de gastroprotección de la mucosa gástrica, los cuales incluyen una adecuada motilidad gastrointestinal y perfusión gástrica, una barrera de moco continua e intacta y mediadores bioquímicos como las prostaglandinas y el óxido nítrico [7, 8]. Una motilidad gastrointestinal incrementada podría promover la protección gástrica al acelerar el vaciamiento gástrico de aquellos agentes Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com dañinos de la mucosa [9]. Por otra parte, la disminución de la motilidad gástrica podría ser un mecanismo de gastroprotección, pues implica menor exposición al agente corrosivo en términos de área superficial [1]. Existen varios compuestos sintéticos disponibles para el tratamiento de la enfermedad úlcero péptica. Sin embargo, estas alterativas terapéuticas tienden a ser costosas y en muchos casos, se asocian con diversos efectos adversos [9, 10]. Por lo tanto, se ha recurrido al estudio de nuevas terapias alternativas o complementarias que brinden mayor seguridad, tales como los productos naturales [9, 11, 12]. Los productos derivados de plantas con actividad antioxidante y gastroprotectora están vinculados con ventajas que abarcan desde la reducción de efectos adversos hasta aspectos de índole socioeconómico [13, 14], convirtiéndolos en atractivas opciones de tratamiento [1, 3, 15]. La planta Licania platypus (Hemsl.) Fritsch. (código 354056), conocida localmente como “sonzapote “zapote mechudo”, es una especie que se encuentra principalmente en la costa Pacífica de Costa Rica [16]. Se ha estudiado su actividad biológica, específicamente la actividad gastroprotectora del extracto etanólico de hojas de esta especie, demostrando un importante efecto gastroprotector asociado con un incremento en las barreras de gastroprotección físicas [17]. Por otra parte, se ha realizado un perfil fitoquímico de los extractos acuoso y etanólico de las hoj esta especie. Este análisis evidenció la presencia de metabolitos secundarios, diferentes en ambos extractos, que están vinculados con la actividad antioxidante y también gastroprotectora (datos no publicados). A partir de estas observaciones, surge la propuesta de estudiar la actividad del extracto acuoso de L. platypus sobre el tracto gastrointestinal. El objetivo de este estudio es evaluar el efecto del extracto acuoso de hojas de L. platypus Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 dañinos de la mucosa [9]. Por otra parte, la disminución de la motilidad gástrica también podría ser un mecanismo de gastroprotección, pues implica menor exposición al agente corrosivo Existen varios compuestos sintéticos disponibles para el tratamiento de la enfermedad úlcero- o, estas alterativas terapéuticas tienden a ser costosas y en muchos casos, se asocian con diversos efectos adversos [9, 10]. Por lo tanto, se ha recurrido al estudio de nuevas terapias alternativas o complementarias que los productos Los productos derivados de plantas con actividad están vinculados con ventajas que abarcan desde la reducción de efectos adversos hasta aspectos de índole socioeconómico [13, 14], convirtiéndolos en atractivas opciones de tratamiento [1, 3, 15]. (Hemsl.) Fritsch. (código sonzapote” o ”, es una especie que se encuentra principalmente en la costa Pacífica de Costa Rica [16]. Se ha estudiado su actividad biológica, específicamente la actividad gastroprotectora del co de hojas de esta especie, demostrando un importante efecto gastroprotector asociado con un incremento en las barreras de Por otra parte, se ha realizado un perfil fitoquímico de los extractos acuoso y etanólico de las hojas de esta especie. Este análisis evidenció la presencia de metabolitos secundarios, diferentes en ambos extractos, que están vinculados con la actividad antioxidante y también gastroprotectora (datos no publicados). A partir de estas observaciones, surge la propuesta de estudiar la actividad del extracto sobre el tracto El objetivo de este estudio es evaluar el efecto del L. platypus sobre la protección gástrica y tránsito gastrointestin utilizando diversos modelos animales. MÉTODOS Y MATERIALES Material Vegetal Los órganos vegetativos con los que se trabajaron fueron recolectados el 24 de mayo del 2010 en la Estación Ecoturística Manú en Limón, Costa Rica. Las hojas de L. platypus Luis J. Poveda Álvarez del herbario “Juvenal Valerio Rodríguez”, lugar donde se mantiene una muestra de este espécimen (código herbario.j.v.r.13918). El material vegetal fue secado a temperatura ambiente durante dos semanas y post pulverizado con un molino de especies Cuisinart® modelo SG-10. Preparación del extracto El extracto crudo acuoso de preparado con agua destilada. Con 200 g de hojas pulverizadas y 500 mL del agua destilada a temperatura de ebullición se realizó la extracción por un periodo de 30 min en un beaker Pyrex® de 1000 mL. Seguidamente se filtró por gravedad con papel filtro Whatman® de calidad cualitativo. Luego se liofilizó para contar con material sólido y pulverizado para los liofilizador LABCONCO® FreeZone 6. Biomodelos Se trabajó en su totalidad con ratas macho de la cepa Sprague Dawley (205 ± 30 g de peso y 7,0 ± 1,0 semanas de edad). Se les permitió un período de aclimatación de 5 días bajo condiciones ambientales en el lugar de trabajo (Temperatura: 20,0 ± 0,8 °C a 24 ± 0,9 °C. Humedad relativa: 73,6% ± 4,3% a 86,4% ± 3,9%. Ruido: 83,1 ± 2,9 decibeles. Fotoperíodo de 12 h) en el Bioterio Central del LEBi. Los animales se mantuvieron en cajas de policarbonato (1291H Tipo III H, Tecniplast®. Dimensiones: 425 x 266 x 185 mm) adecuadas para su tamaño, bajo dieta con para roedores (Concentrados Aguilar & Solís®) suministrada por el Laboratorio de Ensayos Biológicos y agua acidificada (pH 3,1 ± 0,6) libitum. Para el modelo de protección gástrica se , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 12 11-4489. protección gástrica y tránsito gastrointestinal utilizando diversos modelos animales. MÉTODOS Y MATERIALES Los órganos vegetativos con los que se trabajaron fueron recolectados el 24 de mayo del 2010 en la Estación Ecoturística Manú en Limón, Costa Rica. L. platypus fueron identificadas por Luis J. Poveda Álvarez del herbario “Juvenal Valerio Rodríguez”, lugar donde se mantiene una muestra de este espécimen (código herbario.j.v.r.13918). El material vegetal fue secado a temperatura ambiente durante dos semanas y posteriormente pulverizado con un molino de especies Cuisinart® Preparación del extracto El extracto crudo acuoso de L. platypus (EALp) fue preparado con agua destilada. Con 200 g de hojas pulverizadas y 500 mL del agua destilada a de ebullición se realizó la extracción por un periodo de 30 min en un beaker Pyrex® de 1000 mL. Seguidamente se filtró por gravedad con papel filtro Whatman® de calidad cualitativo. Luego se liofilizó para contar con material sólido y pulverizado para los experimentos con un liofilizador LABCONCO® FreeZone 6. Se trabajó en su totalidad con ratas macho de la (205 ± 30 g de peso y 7,0 ± 1,0 semanas de edad). Se les permitió un período de aclimatación de 5 días bajo condiciones ambientales en el lugar de trabajo (Temperatura: 20,0 ± 0,8 °C a 24 ± 0,9 °C. Humedad relativa: 73,6% ± 4,3% a 86,4% ± 3,9%. Ruido: 83,1 ± 2,9 decibeles. Fotoperíodo de 12 h) en el Bioterio Central del LEBi. Los animales se mantuvieron en onato (1291H Tipo III H, Tecniplast®. Dimensiones: 425 x 266 x 185 mm) adecuadas para su tamaño, bajo dieta con pellets para roedores (Concentrados Aguilar & Solís®) suministrada por el Laboratorio de Ensayos Biológicos y agua acidificada (pH 3,1 ± 0,6) ad . Para el modelo de protección gástrica se Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com mantuvieron en ayuno durante 18 horas antes de la inducción de úlceras, mientras que para el modelo de motilidad gastrointestinal el período fue solamente de 6 horas. Durante estos períodos los animales siempre permanecieron con libre acceso al agua acidificada. Además, en ambos casos y para evitar el consumo de otros elementos en el período de ayuno, se colocaron en las cajas rejillas adecuadas para aislar parcialmente las heces y la viruta. El manejo de los animales se realizó siguiendo la Ley Bienestar de los Animales (N 7451) y las directrices estipuladas en la Gu el Cuido y Uso de Animales de Laboratorio (Decreto N° 26668) y fue aprobado por el Comit Institucional de Cuido y Uso de Animales (C de la Universidad de Costa Rica en su oficio CICUA 004-15. Tratamientos Para el modelo de efectos antiulcerosos extracto fue establecida a partir de resultados previos en el momento de analizar la toxicidad a través de un modelo de toxicidad oral aguda. Para esto se trabajó con diferentes dosis (500 1500-2000 mg/kg) en el modelo de inducción de úlceras por etanol (datos no mostrados), estableciéndose la dosis a utilizar en los ensayos posteriores definida en 1000 mg/kg. Por otra parte, para el modelo de motilidad gastrointestinal fueron utilizadas dosis menores (75-125-250-500 mg/kg) debido al marcado efecto de retención gástrica observado en los ensayos mencionados anteriormente. Con estas dosis se pretendía demostrar dosis-dependencia, además de obtener la menor dosis efectiva. Para todos los modelos, los tratamientos de interés se administraron por vía oral, preparándose cada disolución en el momento de utilizarse. Para determinar el efecto sobre el daño gástrico se administró el tratamiento una hora antes del agente gastrolesivo, mientras que en el caso del modelo de motilidad gastrointestinal la administración del EALp se realizó 1,5 horas antes del administrar el agente visualizador. Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 mantuvieron en ayuno durante 18 horas antes de la inducción de úlceras, mientras que para el modelo de motilidad gastrointestinal el período fue solamente de 6 horas. Durante estos períodos los iempre permanecieron con libre acceso al agua acidificada. Además, en ambos casos y para evitar el consumo de otros elementos en el período de ayuno, se colocaron en las cajas rejillas adecuadas para aislar parcialmente las heces y la los animales se realizó siguiendo la Ley Bienestar de los Animales (N° 7451) y las directrices estipuladas en la Guía para el Cuido y Uso de Animales de Laboratorio 26668) y fue aprobado por el Comité Institucional de Cuido y Uso de Animales (CICUA) de la Universidad de Costa Rica en su oficio n.° Para el modelo de efectos antiulcerosos la dosis del extracto fue establecida a partir de resultados previos en el momento de analizar la toxicidad a través de un modelo de toxicidad oral aguda. Para esto se trabajó con diferentes dosis (500-1000- 2000 mg/kg) en el modelo de inducción de ceras por etanol (datos no mostrados), estableciéndose la dosis a utilizar en los ensayos Por otra parte, para el modelo de motilidad gastrointestinal fueron utilizadas dosis menores 500 mg/kg) debido al marcado efecto de retención gástrica observado en los ensayos mencionados anteriormente. Con estas dosis se dependencia, además Para todos los modelos, los tratamientos de interés se administraron por vía oral, preparándose cada disolución en el momento de utilizarse. Para determinar el efecto sobre el daño gástrico se administró el tratamiento una hora antes del agente gastrolesivo, mientras que en el caso del modelo de motilidad gastrointestinal la administración del EALp se realizó 1,5 horas antes del administrar el agente visualizador. Diseño experimental El modelaje experimental fue por bloques, realizando ensayos individuales e independientes para cada modelo. La muestra se definió en un cálculo en base a incidencias seriadas. Para analizar el efecto gastroprotector se trabajó con 3 grupos experimentales de 6 an uno, el primero al que solamente se le administraba vehículo mL/200g peso corporal) correspondiendo al control negativo, un segundo grupo tratado con SUC (500 mg/kg) como control positivo y el tercero de ellos tratado como grupo de interés. En cuanto al modelo de motilidad gastrointestinal, se trabajó con 6 grupos experimentales de 6 sujetos cada uno, los controles positivo y negativo fueron tratados con atropina (3 mg/kg vía subcutánea) y agua po respectivamente. Para los grupos de interés experimental, se trabajaron 4 diferentes dosis, las cuales fueron mencionadas en la sección de Tratamientos. Modelos de ulceración aguda Ulceración gástrica inducida por EtOH La actividad biológica se evaluó con la misma metodología de Orozco administró a todos los sujetos una dosis de alcohol al 95% de 1 mL/kg de peso corporal vía oral por medio de una cánula esofágica para roedor (Cadence Science®, 7914). Luego de un período de 2 horas se aplicó eutanasia a los animales por medio de decapitación con guillotina. Los estómagos fueron diseccionados y lavados con solución salina para ser fotografiados con una cámara Canon Digital Ixus 160. En la observac realizada se consideraron como lesiones cualquier alteración de tipo erosiva observada en la mucosa gástrica. La cuantificación de dichas lesiones gástricas se realizó con ayuda del software computacional ImageTool 3.0®. , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 13 11-4489. Diseño experimental aje experimental fue por bloques, realizando ensayos individuales e independientes para cada modelo. La muestra se definió en un cálculo en base a incidencias seriadas. Para analizar el efecto gastroprotector se trabajó con 3 grupos experimentales de 6 animales cada uno, el primero al que solamente se le administraba vehículo (agua potable, dosis de 1 mL/200g peso corporal) correspondiendo al control negativo, un segundo grupo tratado con SUC (500 mg/kg) como control positivo y el tercero de ellos tratado con EALp (1000 mg/kg) como grupo de interés. En cuanto al modelo de motilidad gastrointestinal, se trabajó con 6 grupos experimentales de 6 sujetos cada uno, los controles positivo y negativo fueron tratados con atropina (3 mg/kg vía subcutánea) y agua potable (dosis de 1 mL/200g) respectivamente. Para los grupos de interés experimental, se trabajaron 4 diferentes dosis, las cuales fueron mencionadas en la sección de Modelos de ulceración aguda Ulceración gástrica inducida por EtOH La actividad biológica se evaluó con la misma metodología de Orozco-Aguilar [17]. Para esto se administró a todos los sujetos una dosis de alcohol al 95% de 1 mL/kg de peso corporal vía oral por medio de una cánula esofágica para roedor 7914). Luego de un período de 2 horas se aplicó eutanasia a los animales por medio de decapitación con guillotina. Los estómagos fueron diseccionados y lavados con solución salina para ser fotografiados con una cámara Canon Digital Ixus 160. En la observación realizada se consideraron como lesiones cualquier alteración de tipo erosiva observada en la mucosa gástrica. La cuantificación de dichas lesiones gástricas se realizó con ayuda del software computacional ImageTool 3.0®. Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com Ulceración gástrica inducida por indometacina El modelo se desarrolló de acuerdo con la metodología de Orozco-Aguilar [17]. El agente lesivo, indometacina (cápsulas M.K. Pharmaceuticals) a una dosis de 45 mg/kg de peso corporal, fue administrado vía oral por medio de una cánula esofágica a todos los animales posterior a la administración del tratamiento. Pasado un período de 5 horas se aplicó eutanasia a los animales con la misma técnica mencionada en la sección anterior. Los tejidos fueron tratados y analizados de igual manera que la sección anterior. Medición del índice de prevención En los modelos anteriores se realizó la cuantificación de un índice de prevención (IP). Para esto se cuantificó la sumatoria del total de área gástrica dañada de cada tejido, la cual es considerada como área de ulceración (AU). El IP se obtuvo a partir de la siguiente fórmula: �� � ����� ��� �� ��� � �� �� ������� ��� �� ��� Modelo de ligadura pilórica Se realizó de acuerdo a modificaciones del trabajo de Shay [18] presentadas en el trabajo de Orozco Aguilar [17]. Brevemente, 1 hora después de la administración del tratamiento se realizó una laparotomía medial bajo anestesia profunda con pentobarbital (Eutanex® Invet), dosis de 50 mg/kg de peso corporal, para realizar una ligadura que limitara el paso a nivel del píloro. Así es posible recolectar fluidos gástricos para su respectivo análisis. Luego de un período de 4 horas seguido al proceso quirúrgico se aplicó eutanasia a los animales por medio de decapitación. Seguido a esto, se retiraron los estómagos mediante la sujeción del esófago para no perder fluidos gástricos durante este proceso. El tejido gástrico obtenido se maceró con suero salino para otros análisis. En este modelo se utilizó como control positivo ranitidina (RAN) a dosis de 100 mg/kg de peso corporal. Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 a por indometacina El modelo se desarrolló de acuerdo con la Aguilar [17]. El agente lesivo, indometacina (cápsulas M.K. Pharmaceuticals) a una dosis de 45 mg/kg de peso corporal, fue administrado vía oral por medio de ágica a todos los animales posterior a la administración del tratamiento. Pasado un período de 5 horas se aplicó eutanasia a los animales con la misma técnica mencionada en la sección anterior. Los tejidos fueron tratados y a sección anterior. En los modelos anteriores se realizó la cuantificación de un índice de prevención (IP). Para esto se cuantificó la sumatoria del total de área gástrica dañada de cada tejido, la cual es mo área de ulceración (AU). El IP se obtuvo a partir de la siguiente fórmula: �� �� ���� � 100 Se realizó de acuerdo a modificaciones del trabajo de Shay [18] presentadas en el trabajo de Orozco- Aguilar [17]. Brevemente, 1 hora después de la administración del tratamiento se realizó una laparotomía medial bajo anestesia profunda con utanex® Invet), dosis de 50 mg/kg de peso corporal, para realizar una ligadura que limitara el paso a nivel del píloro. Así es posible recolectar fluidos gástricos para su respectivo análisis. Luego de un período de 4 horas aplicó eutanasia a los animales por medio de decapitación. Seguido a esto, se retiraron los estómagos mediante la sujeción del esófago para no perder fluidos gástricos durante este proceso. El tejido gástrico obtenido se maceró con suero salino para otros análisis. En este modelo se utilizó como control positivo ranitidina (RAN) a dosis de 100 mg/kg de Medición de parámetros fisicoquímicos en el modelo de ligadura pilórica El contenido gástrico fue centrifugado a 1500 rpm durante 30 minutos. Luego de esto fue cuantificado el volumen y la acidez libre, con un pHmetro marca Thermo Scientific ORIONSTAR A211, del sobrenadante obtenido. La acidez total se determinó mediante una valoración ácido una alícuota de cada muestra, para ello se como valorante NaOH 0,01 N (Laboratorios Químicos Arvi) y fenolftaleína como indicador. La acidez total se expresó como mEq H Medición de parámetros bioquímicos en el modelo de ligadura pilórica Se cuantificó el moco gástrico secretado este proceso de acuerdo al método descrito por Li [19], raspándose gentilmente cada estómago con un portaobjetos y determinando la masa de moco con una balanza analítica Adam® PW254. Estos resultados se reportan como mg de moco/4h en tejido gástrico. La protección contra la peroxidación lipídica se realizó mediante la medición de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico de acuerdo al método de Azofeifa [20]. Los resultados se expresan como nmol malondialdehído (MDA)/g de tejido gástrico. Histopatología Para la examinación a nivel histopatológico de los estómagos obtenidos en los modelos de inducción de úlceras por etanol e indometacina, estos fueron fijados con una disolución de formalina al 10% con amortiguador de fosfatos (Laboratorios Químicos Arvi). Los tejidos fueron deshidratados por gradiente de alcohol y posteriormente colocados en bloques de parafina para seccionar. Los cortes realizados tuvieron un grosor de 5 µm y fueron teñidos con los colorantes h (H&E). El análisis de las secciones se realizó por un patólogo experimentado en ensayo ciego. Modelo de motilidad gastrointestinal Para determinar el efecto de los extractos en la motilidad gastrointestinal se trabajó con la metodología adaptada de Caldas [21]. Se utilizó como sustancia indicadora una dosis de 0,75 mg de , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 14 11-4489. Medición de parámetros fisicoquímicos en el modelo de ligadura pilórica El contenido gástrico fue centrifugado a 1500 rpm s. Luego de esto fue cuantificado el volumen y la acidez libre, con un pHmetro marca Thermo Scientific ORIONSTAR A211, del sobrenadante obtenido. La acidez total se determinó mediante una valoración ácido-base de una alícuota de cada muestra, para ello se utilizó como valorante NaOH 0,01 N (Laboratorios Químicos Arvi) y fenolftaleína como indicador. La acidez total se expresó como mEq H+/ L/4h. Medición de parámetros bioquímicos en el modelo de ligadura pilórica Se cuantificó el moco gástrico secretado durante este proceso de acuerdo al método descrito por Li [19], raspándose gentilmente cada estómago con un portaobjetos y determinando la masa de moco con una balanza analítica Adam® PW254. Estos resultados se reportan como mg de moco/4h en o. La protección in vivo y ex vivo contra la peroxidación lipídica se realizó mediante la medición de sustancias reactivas al ácido tiobarbitúrico de acuerdo al método de Azofeifa [20]. Los resultados se expresan como nmol (MDA)/g de tejido gástrico. Para la examinación a nivel histopatológico de los estómagos obtenidos en los modelos de inducción de úlceras por etanol e indometacina, estos fueron fijados con una disolución de formalina al 10% con or de fosfatos (Laboratorios Químicos Arvi). Los tejidos fueron deshidratados por gradiente de alcohol y posteriormente colocados en bloques de parafina para seccionar. Los cortes realizados tuvieron un grosor de 5 µm y fueron teñidos con los colorantes hematoxilina–eosina (H&E). El análisis de las secciones se realizó por un patólogo experimentado en ensayo ciego. Modelo de motilidad gastrointestinal Para determinar el efecto de los extractos en la motilidad gastrointestinal se trabajó con la ía adaptada de Caldas [21]. Se utilizó como sustancia indicadora una dosis de 0,75 mg de Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com rojo de fenol (Riedel de Haenag, Seelze Hannover) administrado en disolución por c intragástrica en un volumen de 1 mL. Adicional a los grupos mencionados anteriormente, se utilizó un grupo control a tiempo cero al cual se le aplicó eutanasia inmediatamente despué administración del colorante. Al resto de grupos se les aplicó eutanasia luego de un per minutos por la misma vía. Para analizar el efecto en la motilidad g extrajeron los estómagos y se lavó su contenido con 7 mL de agua destilada. El contenido fue centrifugado a 1250 rpm durante 15 minutos. Una alícuota de 1 mL del sobrenadante fue mezclada con 1 mL de hidróxido de sodio 1 N (Laboratorios Químicos Arvi) para leer su absorbancia a 560 nm con un lector de microplacas Biotek Sinergy HT. Los resultados se expresaron como µg de colorante retenido en el tejido gástrico luego de 30 minutos. En cuanto a la motilidad intestinal, los mismos sujetos experimentales fueron utilizados, ya que se obtuvo también el intestino delgado. Utilizando tejido entre la región gastropilórica y la unión ileocecal se midió la distancia recorrida por el colorante. Se expresa el efecto en l como el porcentaje de distancia recorrida por el colorante en relación con el tejido analizado. Análisis estadístico Los resultados obtenidos se expresaron como el promedio ± error estándar. El análisis estadístico se realizó mediante una prueba ANOVA de una vía seguido por una prueba post-hoc de Tukey. Fue considerado un valor de significancia menor que 0,05 para determinar diferencias significativas. Todos los análisis se realizaron utilizando el software estadístico GraphPad Prism 5. RESULTADOS Efecto de EALp en las úlceras gástricas inducidas por etanol e indometacina En el grupo experimental control negativo, al cual se le administró agua como tratamiento en combinación con EtOH al 95 %, se pudo observar un área dañada con un valor de 22,1 ± 3,9 mm Los grupos que recibieron como tratamiento oral Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 rojo de fenol (Riedel de Haenag, Seelze Hannover) n por cánula strica en un volumen de 1 mL. Adicional a ormente, se utilizó un grupo control a tiempo cero al cual se le aplicó és de la n del colorante. Al resto de grupos se les aplicó eutanasia luego de un período de 30 fecto en la motilidad gástrica, se magos y se lavó su contenido con 7 mL de agua destilada. El contenido fue centrifugado a 1250 rpm durante 15 minutos. Una alícuota de 1 mL del sobrenadante fue mezclada de sodio 1 N (Laboratorios Químicos Arvi) para leer su absorbancia a 560 nm con un lector de microplacas Biotek Sinergy HT. Los resultados se expresaron como µg de colorante strico luego de 30 minutos. stinal, los mismos sujetos experimentales fueron utilizados, ya que se obtuvo también el intestino delgado. Utilizando el lórica y la unión ileocecal se midió la distancia recorrida por el colorante. Se expresa el efecto en la motilidad como el porcentaje de distancia recorrida por el colorante en relación con el tejido analizado. Los resultados obtenidos se expresaron como el promedio ± error estándar. El análisis estadístico ueba ANOVA de una vía de Tukey. Fue considerado un valor de significancia menor que 0,05 para determinar diferencias significativas. Todos los análisis se realizaron utilizando el software estadístico GraphPad Prism 5. Efecto de EALp en las úlceras gástricas inducidas En el grupo experimental control negativo, al cual se le administró agua como tratamiento en al 95 %, se pudo observar un área dañada con un valor de 22,1 ± 3,9 mm2. Los grupos que recibieron como tratamiento oral EALp y SUC mostraron una disminución significativa del área lesionada al comparar con el grupo control (AU: 1,3 ± 1,2 mm respectivamente) (p < 0,05, Figura EALp fue del 94 %, mientras que el de SUC fue del 73 %. De la misma manera, los animales pertenecientes al grupo control negativo que recibieron indometacina como agente inductor de úlceras también presentaron lesiones gástricas importantes (AU: 15,3 ± 2,9 mm Con la administración de EALp como tratamiento, se observó una reducción significativa en el área dañada (AU: 2,0 ± 1,4 mm correspondiente a un valor de IP de 87 %. Al administrar SUC también se observó una tendencia de disminución en el área gástrica dañada (AU: 8,7 ± 1,2 mm disminución no fue significativa al comparar contra el grupo control, el valor de Cabe rescatar que el EALp mostró mayor eficacia en el tratamiento de las lesiones gástricas que el SUC. Al analizar los tejidos por medio de un estudio histopatológico fue posible observar que las lesiones provocadas por el EtOH presentan congestión, erosión, necrosis e infiltración leucocitaria, como se observa en la Fig Figura 3B. La administración de EALp demostró brindar protección al tejido gástrico contra el efecto lesivo del EtOH, se observa únicamente un ligero edema en la submucosa (Figura 3D). Con la administración de indometacina, se observó que los tejidos analizados presentaron un importante proceso inflamatorio, disrupción del epitelio, necrosis e infiltración de leucocitos en el epitelio gástrico (Fig administrar EALp el tejido se observa prácticamente sano, evidenciado el efecto gastroprotector de este tratamiento (Figura Figura 4D). , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 15 11-4489. EALp y SUC mostraron una disminución significativa del área lesionada al comparar con el grupo control (AU: 1,3 ± 1,2 mm2 y 6,0 ± 3,6 mm2 respectivamente) (p < 0,05, Figura 2A). El IP de EALp fue del 94 %, mientras que el de SUC fue del De la misma manera, los animales pertenecientes al grupo control negativo que recibieron como agente inductor de úlceras también presentaron lesiones gástricas importantes (AU: 15,3 ± 2,9 mm2). Con la administración de EALp como tratamiento, se observó una reducción significativa en el área dañada (AU: 2,0 ± 1,4 mm2) (p < 0,05, Fig. 2B), orrespondiente a un valor de IP de 87 %. Al administrar SUC también se observó una tendencia de disminución en el área gástrica dañada (AU: 8,7 ± 1,2 mm2). Sin embargo, esta disminución no fue significativa al comparar contra el grupo control, el valor de IP fue de 43 %. Cabe rescatar que el EALp mostró mayor eficacia en el tratamiento de las lesiones gástricas que el Al analizar los tejidos por medio de un estudio histopatológico fue posible observar que las lesiones provocadas por el EtOH presentan congestión, erosión, necrosis e infiltración leucocitaria, como se observa en la Figura 3A y 3B. La administración de EALp demostró brindar protección al tejido gástrico contra el efecto lesivo del EtOH, se observa únicamente un ubmucosa (Figura 3C y Figura Con la administración de indometacina, se observó que los tejidos analizados presentaron un importante proceso inflamatorio, disrupción del epitelio, necrosis e infiltración de leucocitos en el epitelio gástrico (Figura 4A y Figura 4B). Al administrar EALp el tejido se observa prácticamente sano, evidenciado el efecto tector de este tratamiento (Figura 4C y Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com Figura n.°°°° 1. Efecto de la administración oral de EALp inducido por EtOH e inducido por indometacina. Los animales recibieron vehículo (agua, dosis de 1 mL/200g de peso corporal) (A y D), EALp a dosis de 1000 mg/kg (B y E) o SUC a dosis de 500 mg/kg (C y F) 1h antes que el agente inductor de úlceras, EtOH (A, B y C) o indometacina (D, E y F). A Figura n.°°°° 2. Efecto gastroprotector de inducidas por indometacina (B). Los sujetos experimentales recibieron vehículo (agua, 1 mL/200g) en el control negativo, SUC (500 mg/kg) en el control positivo o EALp (1000 mg/kg) 1h antes que el agente inductor de úlceras. El área dañada (mm cada grupo experimental. * p < 0,05. 0 5 10 15 20 25 30 Á re a d añ ad a (m m 2 ) Control SUC * Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 1. Efecto de la administración oral de EALp sobre el proceso de ulceración gástrica inducido por EtOH e inducido por indometacina. Los animales recibieron vehículo (agua, dosis de 1 mL/200g de peso corporal) (A y D), EALp a dosis de 1000 mg/kg (B y E) o SUC a dosis de 500 mg/kg (C e el agente inductor de úlceras, EtOH (A, B y C) o indometacina (D, E y F). B 2. Efecto gastroprotector del EALp sobre las úlceras gástricas inducidas por EtOH inducidas por indometacina (B). Los sujetos experimentales recibieron vehículo (agua, 1 mL/200g) en el control negativo, SUC (500 mg/kg) en el control positivo o EALp (1000 mg/kg) 1h antes que el agente inductor de úlceras. El área dañada (mm2) se expresó como promedio ± SEM, EALp * 0 5 10 15 20 25 30 Á re a d añ ad a (m m 2 ) Control SUC EALp , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 16 11-4489. sobre el proceso de ulceración gástrica inducido por EtOH e inducido por indometacina. Los animales recibieron vehículo (agua, dosis de 1 mL/200g de peso corporal) (A y D), EALp a dosis de 1000 mg/kg (B y E) o SUC a dosis de 500 mg/kg (C e el agente inductor de úlceras, EtOH (A, B y C) o indometacina (D, E y F). EALp sobre las úlceras gástricas inducidas por EtOH (A) e inducidas por indometacina (B). Los sujetos experimentales recibieron vehículo (agua, 1 mL/200g) en el control negativo, SUC (500 mg/kg) en el control positivo o EALp (1000 mg/kg) 1h antes que el xpresó como promedio ± SEM, n=6 animales en Control SUC EALp * Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com Efecto de EALp sobre parámetros fisicoquímicos y bioquímicos En la Tabla n.° 1 se detalla el efecto de EALp sobre varios parámetros relacionados con la secreción ácida. Se observó que la administración de EALp incrementó significativamente (p < 0,05) el volumen de secreción gástrica y la cantidad de moco gástrico respecto al grupo control. Mientras que los valores de acidez total, MDA y MDA-TBPH inducido mostraron una RAN, utilizado en este ensayo como control positivo, únicamente presentó una disminución significativa (p < 0,05) de la acidez total al comparar contra el control negativo. Figura n.°°°° 3. Hallazgos histopatológicos en estómagos extraídos bajo el modelo con EtOH. Cortes en microscopía de luz para los tejidos gástricos extraídos de ratas bajo dicho modelo. (A) imagen representativa del grupo tratado con agua, en (B) se observa en detalle un área focal de necrosis. (C) imagen representativa del grupo experimental con EALp (1000 mg/kg de peso corporal) en donde se observa un tejido sano, detallando en (D) la mucosa sin alteraciones. (E) imagen representativa del grupo control positivo tratado con SUC, (F) el detalle del área erosionada. En las fotografías se puede observar edema en la submucosa (a), áreas focales de necrosis (b) e infiltración leucocitaria (c). Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 Efecto de EALp sobre parámetros fisicoquímicos y 1 se detalla el efecto de EALp sobre varios parámetros relacionados con la Se observó que la administración de EALp incrementó significativamente (p < 0,05) el volumen de secreción gástrica y la cantidad de moco gástrico respecto al grupo control. ores de acidez total, MDA y TBPH inducido mostraron una El fármaco RAN, utilizado en este ensayo como control positivo, únicamente presentó una disminución significativa (p < 0,05) de la acidez total al comparar contra el control negativo. disminución significativa (p < 0,05) respecto al control negativo. Ninguno de los otros parámetros bioquímicos resultó modificado por este fármaco. Efecto de EALp sobre la motilidad intestinal y el vaciamiento gástrico. Los animales tratados con atropina mostraron u disminución significativa (p < 0,05) de la motilidad intestinal respecto al control negativo (61,6 ± 2,5 % y 79,9 ± 1,1 %, respectivamente). Al administrar EALp en dosis de 500, 300, 150 y 75 mg/kg no se observó ningún efecto (p < 0,05) sobre el tránsit intestinal al comparar contra el grupo control (Fig. 5A). 3. Hallazgos histopatológicos en estómagos extraídos bajo el modelo con . Cortes en microscopía de luz para los tejidos gástricos extraídos de ratas bajo dicho modelo. (A) imagen representativa del grupo tratado con agua, en (B) se observa en detalle un área focal de necrosis. (C) imagen representativa del grupo on EALp (1000 mg/kg de peso corporal) en donde se observa un tejido sano, detallando en (D) la mucosa sin alteraciones. (E) imagen representativa del grupo control positivo tratado con SUC, (F) el detalle del área erosionada. En las servar edema en la submucosa (a), áreas focales de necrosis (b) e infiltración leucocitaria (c). , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 17 11-4489. significativa (p < 0,05) respecto al Ninguno de los otros parámetros bioquímicos resultó modificado por este fármaco. Efecto de EALp sobre la motilidad intestinal y el Los animales tratados con atropina mostraron una disminución significativa (p < 0,05) de la motilidad intestinal respecto al control negativo (61,6 ± 2,5 % y 79,9 ± 1,1 %, respectivamente). Al administrar EALp en dosis de 500, 300, 150 y 75 mg/kg no se observó ningún efecto (p < 0,05) sobre el tránsito intestinal al comparar contra el grupo control (Fig. 3. Hallazgos histopatológicos en estómagos extraídos bajo el modelo con . Cortes en microscopía de luz para los tejidos gástricos extraídos de ratas bajo dicho modelo. (A) imagen representativa del grupo tratado con agua, en (B) se observa en detalle un área focal de necrosis. (C) imagen representativa del grupo on EALp (1000 mg/kg de peso corporal) en donde se observa un tejido sano, detallando en (D) la mucosa sin alteraciones. (E) imagen representativa del grupo control positivo tratado con SUC, (F) el detalle del área erosionada. En las servar edema en la submucosa (a), áreas focales de necrosis Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com Figura n.°°°°4. Hallazgos histopatológicos en estómagos extraídos bajo el modelo de indometacina. Cortes en microscopía de luz para tejidos gástricos extraídos bajo este modelo. (A) imagen representativa del grupo control negativo, en (B) se observa en detalle un área focal de necrosis presente en el tejido. (C) imagen representativa del grupo experimental con EALp (1000 mg/kg de peso corporal), en (D) se detalla un mínimo edema en la submucosa. (E) imagen representativa del grupo control positivo tratado con SUC, (F) el detalle del área erosionada. En las fotografías se puede observar edema en la submucosa (a), áreas focales de necrosis (b) e infiltración leucocitaria (c). Tabla n. °1. Efecto de EALp sobre parámetros de contenido gástrico en el modelo de ligadura pilórica. Tratamiento (mg/kg, P.O.) Volumen de secreción gástrica (mL) pH gástrico Control 3,05 ± 0,46 2,30 ± 0,02 RAN(100) 4,50 ± 0,81 3,51 ± 0,60 EALp (1000) 8,05 ± 0,76* 3,09 ± 0, Valores expresados como el promedio ± SEM Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 4. Hallazgos histopatológicos en estómagos extraídos bajo el modelo de Cortes en microscopía de luz para tejidos gástricos extraídos bajo este modelo. (A) imagen representativa del grupo control negativo, en (B) se observa en detalle un área focal de necrosis presente en el tejido. (C) imagen representativa del grupo experimental con EALp (1000 mg/kg de peso corporal), en se detalla un mínimo edema en la submucosa. (E) imagen representativa del grupo control positivo tratado con SUC, (F) el detalle del área erosionada. En las fotografías se puede observar edema en la submucosa (a), áreas focales de necrosis ión leucocitaria (c). Tabla n. °1. Efecto de EALp sobre parámetros de contenido gástrico en el modelo de gástrico Acidez total (mEq [H+]/ L/4h) Moco gástrico (mg/4h) (nmol/g) 2,30 ± 0,02 89,25 ± 1,25 28,45 ± 2,59 3,06 ± 0,07 3,51 ± 0,60 34,50 ± 9,74 * 24,38 ± 1,51 3,38 ± 0,25 ± 0,21 42,33 ± 13,46* 47,13 ± 9,94* 2,76 ± ± SEM. * p < 0,05 comparando contra grupo control , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 18 11-4489. 4. Hallazgos histopatológicos en estómagos extraídos bajo el modelo de Cortes en microscopía de luz para tejidos gástricos extraídos de ratas bajo este modelo. (A) imagen representativa del grupo control negativo, en (B) se observa en detalle un área focal de necrosis presente en el tejido. (C) imagen representativa del grupo experimental con EALp (1000 mg/kg de peso corporal), en se detalla un mínimo edema en la submucosa. (E) imagen representativa del grupo control positivo tratado con SUC, (F) el detalle del área erosionada. En las fotografías se puede observar edema en la submucosa (a), áreas focales de necrosis Tabla n. °1. Efecto de EALp sobre parámetros de contenido gástrico en el modelo de MDA (nmol/g) MDA TBPH- inducido (nmol/g) 3,06 ± 0,07 9,08 ± 0,31 3,38 ± 0,25 9,16 ± 0,30 76 ± 0,08* 7,18 ± 0,31* . * p < 0,05 comparando contra grupo control. Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com A B Figura n.°°°° 5. Efecto de EALp sobre la motilidad intestinal (A) y sobre el vaciamiento gástrico (B). Los sujetos experimentales recibieron vehículo (agua, 1 mL/200g) en el control negativo, atropina (3 mg/kg) en el control positivo o EALp (500, 300, 150 y 75 mg/kg). El porcentaje distancia recorrida (%) y la concentración de rojo fenol (µg/mL) se expresan SEM, n=6 animales en cada grupo experimental. * p < 0,05. Para estudiar el efecto de EALp vaciamiento gástrico se cuantificó la concentración del colorante rojo de fenol a nivel gástrico. Se observó que los animales tratados con atropina y con EALp a dosis de 500 y 300 mg/kg presentaron una disminución significativa (p < 0,05) en el vaciamiento gástrico al comparar contra el grupo control, tratado únicamente con agua. El compuesto atropina provocó una disminución del 93,1 % en el vaciamiento gástrico, mientras que las dosis de 500 mg/kg y 300 mg/kg del EALp disminuyeron en 40,7 % y 47, respectivamente. Esto porque la concentración del colorante fue mayor en los tres grupos mencionados, como se observa en la Figura Al administrar EALp en dosis de 150 y 75 mg/kg el efecto observado no presentó diferencia significativa respecto al control (Figura 0 20 40 60 80 100 P o rc en ta je D is ta n ci a R ec o rr id a (% ) Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 A B EALp sobre la motilidad intestinal (A) y sobre el vaciamiento gástrico (B). Los sujetos experimentales recibieron vehículo (agua, 1 mL/200g) en el control negativo, atropina (3 mg/kg) en el control positivo o EALp (500, 300, 150 y 75 mg/kg). El porcentaje distancia recorrida (%) y la concentración de rojo fenol (µg/mL) se expresan =6 animales en cada grupo experimental. * p < 0,05. Para estudiar el efecto de EALp sobre el vaciamiento gástrico se cuantificó la concentración del colorante rojo de fenol a nivel gástrico. Se observó que los animales tratados con atropina y con EALp a dosis de 500 y 300 mg/kg presentaron una disminución significativa (p < 0,05) en el aciamiento gástrico al comparar contra el grupo control, tratado únicamente con agua. El compuesto atropina provocó una disminución del 93,1 % en el vaciamiento gástrico, mientras que las dosis de 500 mg/kg y 300 mg/kg del EALp disminuyeron en 40,7 % y 47,5 % respectivamente. Esto porque la concentración del colorante fue mayor en los tres grupos ados, como se observa en la Figura 5B. Al administrar EALp en dosis de 150 y 75 mg/kg el efecto observado no presentó diferencia control (Figura 5B). DISCUSIÓN En este trabajo se analizó la actividad farmacológica de un extracto acuoso de hojas de platypus en lesiones gástricas inducidas por dos diferentes agentes, así como varios parámetros asociados a la secreción gástrica y el efecto en la motilidad gastrointestinal. Este reporte establece la primera evidencia de un extracto de esta planta y su efecto sobre la motilidad gástrica, además de apoyar el efecto antiulceroso reportado anteriormente con un extracto diferente que arrojó mecanismos de gastroprotección nuevos para esta especie. Los resultados obtenidos demuestran que dosis altas de EALp confiere ef en varios modelos animales. Los agentes necrotizantes, como el EtOH, inducen daño en la mucosa gástrica por mecanismos asociados a la disminución en los factores gastroprotectores y una estasis en el flujo sanguíneo gástrico [22]. 0 5 10 15 20 25 30 C o n ce n tr ac ió n d e R o jo Fe n o l ( µ g/ m L) , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 19 11-4489. EALp sobre la motilidad intestinal (A) y sobre el vaciamiento gástrico (B). Los sujetos experimentales recibieron vehículo (agua, 1 mL/200g) en el control negativo, atropina (3 mg/kg) en el control positivo o EALp (500, 300, 150 y 75 mg/kg). El porcentaje de distancia recorrida (%) y la concentración de rojo fenol (µg/mL) se expresan como promedio ± En este trabajo se analizó la actividad farmacológica de un extracto acuoso de hojas de L. en lesiones gástricas inducidas por dos diferentes agentes, así como varios parámetros asociados a la secreción gástrica y el efecto en la motilidad gastrointestinal. Este reporte establece la primera evidencia de un extracto de esta planta re la motilidad gástrica, además de apoyar el efecto antiulceroso reportado anteriormente con un extracto diferente que arrojó mecanismos de gastroprotección nuevos para esta Los resultados obtenidos demuestran que dosis altas de EALp confiere efectos gastroprotectores en varios modelos animales. Los agentes necrotizantes, como el EtOH, inducen daño en la mucosa gástrica por mecanismos asociados a la disminución en los factores gastroprotectores y una estasis en el flujo sanguíneo gástrico [22]. Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com Estos fenómenos incrementan la producción de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno, aumentan la peroxidación lipídica y disminuyen la producción de moco gástrico [23]. En este modelo, el EALp induce un efecto gastroprotector incluso superior al SUC. E resultados sugieren un efecto local en la neutralización de contenidos estomacales y un efecto protector tisular, el cual podría relacionarse con un incremento en los factores protectores de la mucosa gástrica, como moco y bicarbonato [21, 24]. Estos mecanismos pueden verse potenciados por el efecto antiinflamatorio demostrado histológicamente a partir de la disminución en el edema y en la infiltración leucocitaria, que autores como Ahmad y colaboradores [25] asocian con una inhibición en la producción de citoquinas proinflamatorias. En otro modelo, se observó que la supresión de la síntesis de prostaglandinas incrementa la susceptibilidad a lesiones sobre la mucosa gástrica. El tratamiento previo con EALp significativamente este efecto, demostrando protección en este modelo ulcerogénico y sugiriendo una asociación de dicha actividad con los niveles de prostaglandinas locales. Además de confirmar su efecto preventivo ante la irritación directa sobre la mucosa. Da Silva et al. [26] proponen que una dosis aguda de un compuesto que tenga el potencial de prevenir alteraciones en los niveles de prostaglandinas locales y brindar protección directa a la mucosa gástrica, tal como lo mostrado por EALp, se asocian a una actividad gastroprotectora eficiente. Esto permite plantear un mecanismo dual de protección para el EALp. Además, nuevamente se confirma la prevención del efecto lesivo a nivel histológico, ya que se demostró una disminución en la infiltració leucocitaria y así un efecto antiinflamatorio que potencia el efecto gastroprotector [27]. Luego de demostrar la actividad biológica independiente del agente que se administre, quedó analizar mecanismos que atribuyan dicho efecto a la inducción positiva en el balance de los factores Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 stos fenómenos incrementan la producción de especies reactivas de oxígeno y nitrógeno, aumentan la peroxidación lipídica y disminuyen la En este modelo, el EALp induce un efecto gastroprotector incluso superior al SUC. Estos resultados sugieren un efecto local en la neutralización de contenidos estomacales y un efecto protector tisular, el cual podría relacionarse con un incremento en los factores protectores de la mucosa gástrica, como moco y bicarbonato [21, mecanismos pueden verse potenciados por el efecto antiinflamatorio demostrado histológicamente a partir de la disminución en el edema y en la infiltración leucocitaria, que autores como Ahmad y colaboradores [25] asocian con una de citoquinas En otro modelo, se observó que la supresión de la síntesis de prostaglandinas incrementa la susceptibilidad a lesiones sobre la mucosa gástrica. disminuyó significativamente este efecto, demostrando protección en este modelo ulcerogénico y sugiriendo una asociación de dicha actividad con los niveles de prostaglandinas locales. Además de confirmar su efecto preventivo ante la irritación re la mucosa. Da Silva et al. [26] proponen que una dosis aguda de un compuesto que tenga el potencial de prevenir alteraciones en los niveles de prostaglandinas locales y brindar protección directa a la mucosa gástrica, tal como lo asocian a una actividad gastroprotectora eficiente. Esto permite plantear un mecanismo dual de protección para el EALp. Además, nuevamente se confirma la prevención del efecto lesivo a nivel histológico, ya que se demostró una disminución en la infiltración leucocitaria y así un efecto antiinflamatorio que potencia el efecto gastroprotector [27]. Luego de demostrar la actividad biológica independiente del agente que se administre, quedó analizar mecanismos que atribuyan dicho efecto a en el balance de los factores de gastroprotección. Para esto, se trabajó con el modelo de ligadura pilórica, el cual induce lesiones a través de la acumulación de fluidos gástricos y la interferencia en el fluido sanguíneo local. Además facilita el análisis de otros parámetros de secreción gástrica [21, 28]. En este biomodelo, el tratamiento con EALp modifica casi todos los parámetros analizados. Este extracto aumentó significativamente el volumen de fluidos gástricos, al mismo tiempo que disminuyó la acid contenido. Este comportamiento se diferencia al control tratado con RAN, en el cual la disminución no se ve acompañada con aumento de contenido gástrico. Ishizuka y colaboradores [29] sugieren que el control de las secreciones ácidas son meca fundamentales en la prevención de ulceras gástricas, de manera que estos resultados permiten sugerir otro eventual mecanismo de gastroprotección para el EALp. En conjunto con el aumento en el volumen gástrico, es sensato sugerir un efecto secretor básico por parte del EALp, el cual apoyaría la actividad observada en los biomodelos mencionados anteriormente. El moco gástrico se considera el principal factor de protección al ser la primera barrera sobre la mucosa gástrica [1]. El extracto analizado e trabajo, al igual que el reportado anteriormente por Orozco-Aguilar et al. [17], indujo un aumento en la cantidad de moco gástrico recolectado en el modelo de ligadura pilórica. Esto se podría asociar con los efectos sobre las prostaglandinas sugeri anteriormente [3, 30]. Nuevamente se apoya la hipótesis de un eventual mecanismo de gastroprotección dual. Tal como se ha mencionó anteriormente, las especies reactivas de oxígeno y nitrógeno afectan negativamente la estructura gástrica [2, 30]. Se ha demostrado que estos compuestos alteran la permeabilidad de la mitocondria induciendo incluso la muerte celular [31]. En este trabajo se utilizó como marcador del daño oxidativo el MDA liberado. El , artículo 2 2017 Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. 20 11-4489. de gastroprotección. Para esto, se trabajó con el modelo de ligadura pilórica, el cual induce lesiones a través de la acumulación de fluidos gástricos y la interferencia en el fluido sanguíneo local. Además is de otros parámetros de secreción gástrica [21, 28]. En este biomodelo, el tratamiento con EALp modifica casi todos los parámetros analizados. Este extracto aumentó significativamente el volumen de fluidos gástricos, al mismo tiempo que disminuyó la acidez de dicho contenido. Este comportamiento se diferencia al control tratado con RAN, en el cual la disminución no se ve acompañada con aumento de contenido Ishizuka y colaboradores [29] sugieren que el control de las secreciones ácidas son mecanismos fundamentales en la prevención de ulceras gástricas, de manera que estos resultados permiten sugerir otro eventual mecanismo de gastroprotección para el EALp. En conjunto con el aumento en el volumen gástrico, es sensato sugerir ásico por parte del EALp, el cual apoyaría la actividad observada en los biomodelos mencionados anteriormente. El moco gástrico se considera el principal factor de protección al ser la primera barrera sobre la mucosa gástrica [1]. El extracto analizado en este trabajo, al igual que el reportado anteriormente Aguilar et al. [17], indujo un aumento en la cantidad de moco gástrico recolectado en el modelo de ligadura pilórica. Esto se podría asociar con los efectos sobre las prostaglandinas sugeridos anteriormente [3, 30]. Nuevamente se apoya la hipótesis de un eventual mecanismo de Tal como se ha mencionó anteriormente, las especies reactivas de oxígeno y nitrógeno afectan negativamente la estructura gástrica [2, 30]. Se ha demostrado que estos compuestos alteran la permeabilidad de la mitocondria induciendo incluso la muerte celular [31]. En este trabajo se utilizó como marcador del daño oxidativo el MDA liberado. El EALp demostró Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. V Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de Costa Rica, 2060 San José, Costa Rica. ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. Contáctenos: rev.med.ucr@gmail.com brindar protección antioxidante en dos mé diferentes, daño oxidativo inducido por la pilórica y potenciado por TBPH. Se sugiere que EALp disminuye el efecto de la hipoxia/reperfusión, protegiendo ante el daño provocado por las especies reactivas de oxígeno y disminuyendo la infiltración leucocitaria [19]. Este comportamiento se encuentra ausente en el grupo tratado con RAN, coincidiendo con reportes previos [32]. Nuevamente se justifica la gastroprotección observada en los modelos de inducción de úlceras por EtOH e indometacina. El efecto marcado en la acumulación de líquidos gástricos permitió plantear un mecanismo protector, pero también la posible actividad sobre la motilidad gastrointestinal. Además se ha demostrado que los desórdenes en el vaciamiento gástrico se asocian a daño tisular [21, 33]. La evaluación biológica en la motilidad gastrointestinal demuestra que el EALp interfiere en el vaciamiento gástrico, mas no así en el tránsito intestinal. Este efecto se analizó a dosis menores por los resultados obtenidos en el modelo ligadura pilórica. Esto a diferencia del tratamiento con atropina utilizado como control. Este último altera la vía colinérgica, la cual controla mayoritariamente el flujo desde el estómago hacia el duodeno. Sin embargo, la inhibición parcial del vaciamiento gástrico sin efecto sobre la motilidad intestinal mostrado por el EALp sugiere la relación parcial con la vía colinérgica o bien la asociación con otros mediadores gástricos [21, 34]. Por otra parte, Rozza y colaboradores [1] asocia la disminución en el vaciamiento gástrico con la subsecuente reducción en el área superficial gástrica, provocando un menor contacto efectivo con los factores gastrolesivos, contribuyendo así a los efectos descritos anteriormente. CONCLUSIONES Este trabajo permite concluir que el tratamiento con dosis altas de EALp brinda un efecto gastroprotector en modelos animales de ulceración con EtOH e indometacina y el modelo de ligadura pilórica asociado con la disminución en Revista Médica de la Universidad de Costa Rica. Volumen 11, número 2, artículo Revista electrónica publicada por el Departamento de Farmacología de la Escuela de Medicina de la Universidad de ® All rights reserved. Licensed under a Creative Commons Unported License. rev.med.ucr@gmail.com. Tel: (506) 25-11 4492, Fax: 25-11 brindar protección antioxidante en dos métodos diferentes, daño oxidativo inducido por la ligadura Se sugiere que EALp disminuye el efecto de la hipoxia/reperfusión, protegiendo ante el daño provocado por las especies reactivas de oxígeno y ción leucocitaria [19]. Este comportamiento se encuentra ausente en el grupo tratado con RAN, coincidiendo con reportes previos [32]. Nuevamente se justifica la gastroprotección observada en los modelos de inducción de úlceras por EtOH e indometacina. efecto marcado en la acumulación de líquidos gástricos permitió plantear un mecanismo protector, pero también la posible actividad sobre la motilidad gastrointestinal. Además se ha demostrado que los desórdenes en el vaciamiento tisular [21, 33]. La evaluación biológica en la motilidad gastrointestinal demuestra que el EALp interfiere en el vaciamiento gástrico, mas no así en el tránsito intestinal. Este efecto se analizó a dosis menores por los resultados obtenidos en el modelo de ligadura pilórica. Esto a diferencia del tratamiento con atropina utilizado como control. Este último altera la vía colinérgica, la cual controla mayoritariamente el flujo desde el estómago hacia el duodeno. Sin embargo, la inhibición parcial del miento gástrico sin efecto sobre la motilidad intestinal mostrado por el EALp sugiere la relación parcial con la vía colinérgica o bien la asociación con otros mediadores gástricos [21, 34]. Por otra parte, Rozza y colaboradores [1] asocia la n el vaciamiento gástrico con la subsecuente reducción en el área superficial gástrica, provocando un menor contacto efectivo con los factores gastrolesivos, contribuyendo así a luir que el tratamiento con dosis altas de EALp brinda un efecto gastroprotector en modelos animales de ulceración con EtOH e indometacina y el modelo de ligadura pilórica asociado con la disminución en las secreciones ácidas, el aumento de la secreción de moco en el tejido gástrico y el efecto antioxidante que en conjunto hacen posible un aumento en las defensas físicas sobre la mucosa gástrica, además de provocar una disminución en el vaciamiento gástrico que puede potenciar el efecto anterior. AGRADECIMIENTOS Este trabajo fue financiado por la Vicerrectoría de Investigación de la Universidad de Costa Rica bajo el proyecto Nº B6 agradecimiento al Ph.D. Pedro García y Lic. Luis Poveda Álvarez por facilitar el material vegetal, además de a las Ph. D. Gabriela Azofeifa y Ph. D. Silvia Quesada por el asesoramiento en los ensayos de peroxidación lipídica. REFERENCIAS 1. Rozza A, Hiruma Lima C, Takahira R, Padovani C, Pellizzon C. Effect of menthol in experimentally induced ulcers: Pathways of ga Biol Interact. 2013; 2. García Barrantes P properties of Quassia amara standardized extract in rodent models. Ethnopharmacol. 2011; 3. Zakaria ZA, Balan T, Suppaiah V, Ahmad S F. Mechanism(s) of action involved in the gastroprotective activity of Ethnoparmacol. 2014; 4. Al-Sayed E, El-Naga R. Protective role of ellagitannins from Eucalyptus citriodora gastric ulcer in rats: Impact on oxidative stress, inflammation and calcitonin Phytomedicine. 2015; 5. Wallace J. Prostaglandins, NSAIDs, and gastric mucosal protection: Why doesn’t the stomach dige itself?. Physiol Rev. 2008; 88: 1547 6. Zapata Colindres JC, Zepeda Gómez S, Montaño Loda A, Vázquez Ballesteros E, Villalobos J, Valdovinos Andraca F. 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Silvia Quesada por el asesoramiento en los ensayos de peroxidación lipídica. Rozza A, Hiruma Lima C, Takahira R, Padovani C, Pellizzon C. Effect of menthol in experimentally thways of gastroprotection. Chem- 2013; 206: 272-278. Barrantes P, Badilla B. Anti-ulcerogenic Quassia amara L. (Simaroubaceae) standardized extract in rodent models. J . 2011; 134: 904-910. Balan T, Suppaiah V, Ahmad S, Jamaludin . Mechanism(s) of action involved in the gastroprotective activity of Muntingia calabura. J 2014; 151: 1184-1193. Naga R. Protective role of ellagitannins Eucalyptus citriodora against ethanol-induced gastric ulcer in rats: Impact on oxidative stress, inflammation and calcitonin-gene related peptide. . 2015; 22(1): 5–15. . Prostaglandins, NSAIDs, and gastric mucosal protection: Why doesn’t the stomach digest Physiol Rev. 2008; 88: 1547-1565. Zapata Colindres JC, Zepeda Gómez S, Montaño Loda A, Vázquez Ballesteros E, Villalobos J, Valdovinos Andraca F. 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