Steve Beebe y Fabio Pedraza Perspectivas para el uso de Marcadores Moleculares en el Mejoramiento del Frijol Steve Beebe y Fabio Pedraza Proyecto Frijol CIAT, Cali, Colombia RESUMEN and in early generation negative selection, to elimínate plantsthat have alreadyfixed undesirable Los marcadores moleculares son la herra­ al leles. Several áreas of f uture work are mentioned. mienta más novedosa para el mejoramiento de cultivos en los últimos años. En el caso de frijol INTRODUCCION (Phaseolus vulgaris L) ya existen una gama amplia de marcadores de ADN para caracteres útiles. Los marcadores moleculares de ADN han sido Para poder utilizar estos marcadores en forma la novedad más revolucionaria en el mejoramiento efectiva y eficiente, los mejoradores tienen que de plantas en los últimos 20 años. Si bien no han encontrar los puntos en sus programas de mejora­ demostrado todavía un amplio impacto práctico, miento donde la aplicación de los marcadores será pues en las posibilidades que abren han estimulado más productiva en relación al costo. los mejoradores a pensar mucho más allá de la selección fenotípica que ha sido la base de su Se discuten tres posibles modos de emplear la profesión hasta ahora. Selección Asistida por Marcadores (SAM): en las retrocruzas, inclusive para caracteres controlados Sus ventajas y usos potenciales han sido cita­ por hasta 4 genes; en la Selección Gamética; y en dos con más frecuencia de lo que se han realizado. generaciones tempranas para selección negativa Estos incluyen: la selección de caracteres sin la para eliminar plantas que ya han fijado alelos no- necesidad de probar materiales en el campo bajo deseables. Se mencionan unas áreas de trabajo un ambiente particular para lograr la expresión del que aún faltan para desarrollar para implementar fenotipo buscado; selección segura de caracteres la SAM efectivamente. que en el campo presentan gran variabilidad ambiental y baja heredabilidad; selección de varios ABSTRACT caracteres en un sistema común; la posibilidad de piramidar genes de resistencia en combinaciones Molecular markers are the most novel breeding que al contrario serían difíciles de reconocer por tool to be developed in recent years. In the case of fenotipo. common bean (Phaseolus vulgaris L), there exists already a wide range of DNA markers for useful Mientras la realización de estas ventajas ha characters. To be able to use these markers sido lenta en manifestarse, la ciencia de la biología effectively and efficiently, bean breeders need to molecular y los marcadores moleculares está find the critical points in their breeding programs avanzando rápidamente, y dentro de unos años where the application of markers will be most veremos sin duda muchas de estas expectativas productive in relation to the cost. Three modes of cumplidas. Sin embargo, se cumplirán no porque applying Marker Assisted Selection (MAS) are un biotecnólogo lo haya hecho, sino porque los discussed: in backcrossing, including traits mejoradores hemos sido lo suficiente imaginativos controlled by up to four genes; in gametic selection; para encontrar donde y como aplicar los 129 PROFRIJQL^ Taller Internacional de Mejoramiento Genético de Frijol Negro Mesoamericano marcadores en nuestros programas de mejora­ identificación de marcadores ligados a genes múlti­ miento. Tenemos que buscar los puntos claves en ples requiere más trabajo; los modelos matemáticos los programas de selección donde los marcadores para identificarlos son más complejos. Pero lo puedan aplicarse eficientemente, o bien, tenemos peor de todo es que, habiendo terminado el trabajo que estructurar nuestros programas para de marcar los genes, a veces no hay ningún gen aprovechar la potencial de los marcadores. que es tan importante para que valga la inversión de dinero de seleccionarlo con los marcadores. Si Por cierto, los marcadores tienen sus este es el caso, y bien puede ocurrir, entonces uno limitaciones. Son trabajosos para identificar. Ante pierde el esfuerzo de haber marcado los genes. todo, todos los marcadores de ADN hasta ahora Los llamados QTL (Loci de Carácter Cuantitivo) son en uno u otro grado costosos. Algunos, espe­ son un desafio particular en la ciencia de marcar cialmente los RAPDs(ADN Polimórfico Amplificado genes e implementar los marcadores. Aleatoriamente) dan resultados variables cuando las condiciones de laboratorio varían. Pero quizás Un último punto general en relación a los el limitante más importante para su uso práctico y marcadores es su característica de dominancia o amplio es la necesidad de que el polimorfismo (es co-dominancia. En términos prácticos, la decir, la presencia o ausencia de una banda de significancia de dominancia o co-dominancia de ADN, o una diferencia en peso de una banda) sea los marcadores es el poder de distinguir el estado detectable en relación a los demás padres con los homocigoto o heterocigoto de un gen cercano. cuales la fuente de un carácter será cruzado. Si un marcador de un gen (ó un alelo, como es el caso Es decir, algunos marcadores pueden distinguir muchas veces) existe en otros padres que no entre un homocigoto AA y un hetrocigoto Aa, y tienen el gen/alelo, entonces el marcador no sirve otros no. Los RFLPs tienen esta capacidad y por para reconocer la presencia del gen/alelo. En este tanto son co-dominantes. La mayoría de los RAPDs sentido, polimorfismos que distinguen acervos y no lo tienen y son dominantes, pues los dos razas de frijol son útiles para introgresar genes de genotipos AA y Aa producen la misma banda un acervo o raza a otro. Por ejemplo, un marcador única, aunque algunos RAPDs si producen dos de un gen de resistencia derivado del acervo bandas co-dominantes reflejando la presencia de andino probablemente servirá ampliamente dentro los dos alelos A y a. La lista de RAPDs co­ del acervo mesoamericano. También, es muy útil dominantes está creciendo, y quizás algún día que los marcadores sean mapeados en relación a será lo suficiente grande de representar una buena otros marcadores cercanos en el genoma, para parte del genoma. que estos otros marcadores puedan servir de opción para marcar el gen, pues entre varios UN INVETARIO DE GENES Y MARCADORES marcadores alguno pueda expresarse como polimórfico en las combinaciones de padres El frijol es un cultivo de menor importancia en utilizados. los países desarrollados, sin embargo ha recibido mucha atención en cuanto a marcadores La mayoría de los caracteres para los cuales moleculares. Esto puede tener varias razones. hay marcadores identificados son controlados por Primero, siendo un cultivo anual de corto ciclo, el genes mayores, y muchos son de resistencias. frijol se presta para estudios genéticos de todo Los caracteres de genes menores o cuantitativos tipo. Segundo, el frijol es notoriamente susceptible son por su naturaleza más problemáticos para a patógenos, por tanto es atractivo para marcar marcar por varios razones: datos confiables de genes de resistencia que muchas veces son genes campo que son esenciales para identificar mayores y relativamente fácil de marcar. Tercero, marcadores son más difíciles de conseguir, ya que los acervos y razas de frijol permiten bastante la expresión de estos genes es menos estable; la polimorfismo para estudios de ADN. VERACRUZ, MEXICO. Enero 1,998 130 • Steve Beebe y Fabio Pedraza Los primeros trabajos mayores con marcadores Tabla 1 han sido desarrollados dentro de la cola­ de ADN en el frijol fueron la creación de mapas boración con PROFRIJOL. Utilizando en la cruza basados en RFLPs (Nodari et al, 1993; Vallejos et de DOR 364 x G19833, se ha creado un mapa al, 1992). Algunos genes de interés agronómico basado en RAPDs , AFLPs y sondas de RFLPs. estaban segregando en estas poblaciones, sin Esta población segrega por varios caracteres que embargo, no hay informe de que los marcadores son útiles en Centroamerica: raíces eficientes y generados en estas poblaciones se están utilizando absorción de fosforo; resistencia a BG M V (evaluado en el mejoramiento. Estos mapas sirvieron en Puerto Rico y en CIAT); resistencia a principalmente para establecer los grupos de antracnosis; resistencia a mancha angular. ligamiento con marcadores en forma de sondas Esperamos poder emplear los marcadores en la que fueron reproducibles. selección pronto. Estos mapas fueron seguidos por esfuerzos En la cuarta columna aparece el número de de marcar genes para caracteres específicos. El marcadores tipo SCAR de los cuales tenemos primer marcador RAPD reportado en frijol para un conocimiento hasta ahora. Los SCARs son un tipo gen de resistencia fue consignado por Miklas et al de marcador como RAPDs en el sentido que (1993) y pronto siguieron muchos otros (Freyre et emplean el proceso de PCR (Reacción de al, in press). Polimerasa encadena). Sin embargo, los SCARs son más estables y permiten mayor confianza que En la Tabla 1, se encuentra un resumen de los los RAPDs, de los cuales los SCARs son genes reportados para caracteres importantes en frecuentemente derivados. En muchos casos, es el mejoramiento del frijol negro para Centroamerica. necesario de convertir los marcadores RAPDs (u En la primera columna está identificado el carácter, otros) en SCARs para que su uso sea factible en seguido en la segunda columna por el número de una escala grande con confianza. Los ASAP son genes relacionado con ese carácter. En unos una modificación de los SCARs que permiten casos el número de genes se deduce de patrones obviar el paso de electroforesis. de segregación, en otros casos se deduce precisamente de los trabajos con marcadores y el análisis de QTLs. El propósito de este cuadro es ESPECULAOONES SOBRE EL MEJORAMIENTO fijar unos parámetros dentro de los cuales podemos pensar en términos realistas del número de genes Antes de considerar la aplicación de marca­ con los cuales trabajamos. Para este conjunto de dores en sí, debemos reflexionar sobre las caracteres, vemos que se ha identificado unos 66 implicaciones del número de genes con los cuales genes. Aunque este listado no es exhaustivo, sí estamos trabajando. Esto no es una reflexión que incluye la mayoría de los caracteres de interés es única al caso de marcadores, pues tiene práctico para Centroamerica. La tercera columna relevancia a cualquier sistema de mejoramiento representa los genes para los cuales existen algún que empleamos, con o sin marcadores. Sin tipo de marcador molecular. Se ve por ejemplo embargo, el hecho de haber identificado genes o que hay marcadores para 7 de los 9 genes de QTLs da mas realismo al caso, pues estamos resistencia a roya, y 5 de los 7 genes reconocidos hablando de genes que realmente quisiéramos para antracnosis. Incluyendo los marcadores para reunir en un genotipo ideal. QTLs, que por cierto definen la existencia del gen, hay un total de unos 50 marcadores asociados con La última columna de Tabla 1 está encabezada los genes. Para un cultivo de importancia “Mínimo número de genes necesarios”. Estas cifras secundaria, este es un número muy sustancial. son especulativas y representan un intento de estimar que es el número mínimo de genes Algunas de los marcadores representados en deseables que son requeridos en la “variedad PROFRIJOL^ Taller Internacional de Mejoramiento Genético de Frijol Negro Mesoamericano perfecta”. Por ejemplo, para resistencia a antracno- Al sumar el número mínimo de genes, nos da sis, aunque hay unos siete genes identificados, un total de 25 genes. Quí implica tal número de hay combinaciones de dos genes que conceden genes para el trabajo de mejoramiento? resistencia universal a toda raza de Colletotrichum. Supongamos que tuviéramos una población F2 Por tanto, fijamos dos como el número mínimo de segregando para estos genes, cada uno en propor­ genes para resistencia a antracnosis. Obviamente ción de 50%, y llevamos esta población a generacio­ quisiéramos tener más seguridad, pero dos genes nes avanzadas por Descendencia de Semillas son el mínimo para lograr esa resistencia universal. Unicas. Qué es la probabilidad de encontrar una En unos casos como para la eficiencia en uso de sola planta con todos los genes, y qué tamaño de fósforo, no hay información sobre el número de población necesitaríamos para encontrar esa genes. En tales casos se ha incluido una cifra que planta ? Esto equivale a (1/2)2S, es decir, 1 en es más bién conservador, por ejemplo, que se 33,554,432. Tal población ocuparía unos 168 ha! requieren dos genes mínimos para tolerancia a sequía. El mensaje es sencillo: con un número elevado de genes segregando en las progenies, la De nuevo, el propósito de este ejercicio es de probabilidad es muy baja de reunir todos los genes fijar unos parámetros realistas dentro de los cuales en una sola línea. Por tanto hay que recurrir a podemos orientar el trabajo de selección, formas de aumentar estas probabilidades, y hay incluyendo el uso de marcadores. casos donde los marcadores moleculares pueden ser una herramienta útil para este fin. Tabla 1: Resumen de algunos genes reportados para caracteres útiles en el frijol, y los marcadores asociados con algunos de ellos. Algunos caracteres Número de genes Genes Marcadores Mínimo útiles identificados marcados SCARs número (incluyendo QTL) de genes RESISTENCIAS necesarios Hongos Roya 9 [c]* 4 [j.k.r.n] 1 [Q] 1 antracnosis 7 [c] 4 [a,b,g,A'j 2 [a,q] 2 mancha angular - - 2 Macrophomina 2 [x] 2 [x] 1 Mustia 5 [n] 5 [n] Fusarium oxysporum 2 [c] - Bacteria Xanthomonas 8 [vj, 5-7 [n] 8 [v], 5-7 [n] 2 [e,o] 2 Virus BCMV 5 [c] 2 [k,l,m] 2 [m,q] 1 BGMV 4 [s,t,y] 3 [s,y] 1 [e] 3 Rugoso 2 [c] - Nem atodos 3 [c] - Insectos Zabrotes 1 [c] 1 [g] 1 Apion 1 [d] 1 [d] 1 [d] 1 Empoasca — VERACRUZ, MEXICO. Enero 1,998 132 Steve Beebe y Fabio Pedraza FACTORES ABIOTICOS Nodulación 7 [v] 7 [v] FBN 5 [e] 5 [e] 3 Raices/absorción P 7 [e] 7 [e] 4 Eficiencia P - - 2 Sequía 9 [w] 9 [wj 2 Fotoperiodo 2 [c] 2 [h,¡] Tolerancia bajo hierro 2 [c] - Eficiencia potasio 1 [c] TOTAL 82 60 9 25 * Letras se refieren a citaciones en la bibliografía EL USO DE MARCADORES MOLECULARES La retrocruza con un solo gen es muy sencillo, pero la retrocruza con genes múltiples es más Un buen uso de marcadores en un sistema compleja, ya que hay que tomar en cuenta la práctico de mejoramiento, es decir, para Selección probabilidad de transmitir los genes deseados a la Asistida por Marcadores (SAM), tiene que tomar siguiente generación. Tomemos un ejemplo de 2 en cuenta la eficiencia del sistema, refiriendo al genes, Ay B. La probabilidad de transmitir cualquier costo de los marcadores. Hay que encontrar los de los 2 genes individualmente desde un hete- puntos en el programa de mejoramiento donde los rocigoto (ej, la F1) sería 0.5, y la probabilidad de marcadores pueden tener un impacto importante transmitir los 2 genes juntos en un solo gameto es en aumentar a las probabilidades de encontrar los (0.5 x 0.5), o sea, 0.25. Es decir, 0.25 de los genotipos deseados, sin que el costo sea excesivo. gametos serían de tipo AB. Por tanto, hay que Este es el reto que tendremos que enfrentar muy hacer suficientes polinizaciones para asegurar pronto. Tomaremos tres ejemplos para ilustrar el que algunos de estos gametos pasan a la siguiente posible uso de marcadores. generación. Se requiere unas 4 plantas para encon­ trar uno con los dos genes A y B (o más o menos Las retrocruza s el doble para asegurar la existencia de esta planta con una probabilidad en 90%). En cuanto el número La retrocruza es quizás el método de mejora­ de genes para retrocruzar aumente, el número de miento más utilizado por la seguridad que da para plantas necesarias aumenta exponencialmente. recuperar el tipo de planta deseada. La retrocruza En la Tabla 2 aparece el número mínimo de plantas sirve para manipular un número limitado de genes para poder transferir diferentes números de genes intensivamente e introducirlos en una variedad de un padre heterocigótico a su progenie. conocida. Si los genes que serán manipulados por retrocruza son lo suficiente valiosos, pueda que Los marcadores pueden servir para identificar serán introducidos en un gran número de varieda­ los genes que han pasado a las progenies, y así des y lineas, a tal punto que en futuras poblaciones seleccionar las plantas que servirán como padres los genes parezcan en la mayoría de los padres y en otro ciclo de retrocruzamiento. ya segregan poco o nada en los progenies. Esto fue el caso, por ejemplo, con el gene I para Para el frijol el paso limitante probablemente resistencia a BCMV, que fue tan ampliamente es la polinización, pues para cada polinización se utilizado en los programas de mejoramiento en el puede esperar en promedio alrededor de 1 semilla CIAT, que muchas cruzas ya no involucraba ningún híbrida (calculando una taza de éxito de 50% en padre susceptible. las polinizaciones, y un promedio de dos semillas por vaina híbrida). Es relativamente fácil transferir 133 PROFRIJOL^ Taller Internacional de Mejoramiento Genético de Frijol Negro Mesoamericano hasta 4 genes (con 16 a 36 polinizaciones) pero la frijol en Centroamerica? La resistencia a BGMV polinización llega a ser limitante para transferir 5 o parece ser controlada por unos 4 genes relativa­ 6 genes, pues hay que producir entre 64 y 147 mente más importante, y otros menores. Pronto semilla híbrida para transferir 6 genes. Esto es debemos tener marcadores para estos 4 genes, y factible en casos de alta prioridad, pero sería difícil así podríamos practicar retrocruzamiento. Una hacerlo rutinariamente para varios genotipos. posibilidad sería para introducir los genes de También para el uso de los marcadores, es factible resistencia a BGMV a otros materiales fuentes de la evaluación de este número de plantas pero genes de gran interés, por ejemplo, fuentes para sería difícil hacer rutinariamente con muchos tolerancia a bajo fósforo o a sequía. Así se podría materiales. Por ejemplo, para probar 100 progenies usar estos materiales en cruzas sin diluir la resis­ para 6 marcadores, se harían secuencialmente, tencia al mosaico dorado. Igualmente, se podría probando 100 por el primer marcador, después mejorar las variedades criollas para BGMV con entre los 50 progenies que tienen el marcador, se retrocruzamiento. prueba el segundo, etc. En total, se requerirían unos 200 reacciones de PCR. En conclusión, Otro uso de retrocruzas podría ser para tanto para la mecánica de retrocruzamiento como aprovechar los 4 genes ya identificados para fijación para la aplicación de los marcadores, 4 ó 5 genes de nitrógeno y provenientes de BAT 477, para son el límite para trabajo rutinario. mejorar FBN en cultivares ya establecidos. La mejora de la absorción de nutrientes en los cultiva­ Qué oportunidades hay para utilizar res, usando 4 genes de G19833 para un mejor marcadores para agilizar retrocruzamiento para el sistema radicular, es otra opción. Tabla 2: Números de plantas y polinizaciones requeridas para retrocruzar n genes simultáneamente. Número Número Mínimo Número Numero Mínimo de Genes (n) de Plantas de polinizaciones de Plantas, 90% confianza 1 2 2 4 2 4 4 8 3 8 8 17 4 16 16 36 5 32 32 73 6 64 64 147 7 128 128 294 8 256 256 589 La Selección Gamética presencia de los genes en las varias generaciones, La Selección Gamética (SG) se ha comprobado esto aumentaría la eficacia de SG. Los marcadores como un método eficaz para reunir genes de moleculares pueden tener aplicación dentro de un diversas fuentes en poblaciones segregantes. El plan de SG, para asegurar que los híbridos utiliza­ éxito de SG depende de la descendencia de los dos en cada generación como padres de cruzas genes de interés a través de varias generaciones complejos tienen los genes deseados heredados de cruzamiento. Si hubiera forma de confirmar la de la generación anterior. VERACRUZ, MEXICO. Enero 1,998 134 • Steve Beebe y Fabio Pedraza Pongamos un ejemplo. Suponemos que deseamos reunir 5 genes a través de la SG, y los 5 genes se encuentran en 5 padres distintos, 1 gen en cada padre. Se puede estructurar la cruza así. x B) x (C x D)] x E 11 ii F1 AaBbccdd X F1 aabbCdDd 1I 11 1/4 ABcd 1/4 abCD I| F1 x E 1/16AaBbCcDd I 1/16ABCD I F1 1/256 AaBbCcDdEe En cada generación los gametos de los F1 producir una F1 con todos los genes deseados. segregan. Con referencia al gen de cada padre, la Falta referimos a la aplicación de SAM en F1 (A x B) segrega 1/4 gametos que llevan los 2 poblaciones segregantes de F2 en adelante. genes de padres A y B, así también la F1 de C y Selección negativa en generaciones tempranas. D. Por tanto, entre los F1 [(A x B) x (C x D)] hay solo 1/16 que tienen todos los 4 genes. Esas pocas Hay varias formas que uno puede visualizar el plantas a su vez segregan 1/16 de sus gametos uso de marcadores en poblaciones segregantes: con los 4 genes, así que hay solo 1 en 256 del la evaluación de plantas individuales en F2 o F3; último F1 que reciben los 4 genes A, B, C y D. Se hasta la evaluación de marcadores en centenares ve que sería muy provechoso poder selección en o miles de lineas avanzadas. En estos casos cada generación (ej, entre los F1 [(A x B) x (C x D)] enfrentamos el reto de aplicar una tecnología ) que tienen los genes deseados. costosa y a veces dispendiosa en grandes números de plantas. Vamos a considerar una alternativa Esto sería una aplicación potencial para los que podría ser relativamente económica. Involucra marcadores. En este caso, se podría buscar entre la selección negativa en generaciones tempranas, los F1 [(A x B) x (C x D)] para identificar las plantas con el fin de aumentar la frecuencia de alelos (1 en 16) de genotipo AaBbCcDd, para utilizar solo favorables que a lo largo, tendrá un efecto muy estos para crear la siguiente generación. Por significativo en las probabilidades de encontrar igual, se podrían aplicar los marcadores en la lineas superiores. Cuando pensamos en la selec­ última generación para identificar las de genotipo ción negativa en generaciones tempranas, quizás AaBbCcDdEe, y así asegurar que el trabajo de nos parece ineficiente ya que el alto grado de selección se enfoca en las familias de mayor heterocigocidad oculta los alelos no-deseados, potencial. especialmente si son recesivos. De hecho, si desarrollamos marcadores de PCR ligados a los Consta que el resultado de aplicar SAM en el alelos que querremos seleccionar, estos marcado­ proceso de SG como se ha descrito arriba, es res serán dominantes y los marcadores de los no- FROFRIlOLfc Taller Internacional de Mejoramiento Genético de Frijol Negro Mesoamericano deseados probablemente serán recesivos. probabilidad de encontrar AA ó Aa, y sobre los 10 Entonces, que ventaja hay en la selección negativa loci, hay (0.75)10 ó 0.056 probabilidad de encontrar en generaciones tempranas? todos los loci en esta condición. En esta fase de la segregación, todavía hay más que 5% de la Tomamos un ejemplo de 10 genes, y asumimos población con potencial de segregar los 10 genes que en nuestra población base están segregando favorables! No requiere una población F2 muy los dos alelos A y a en cada locus en proporción grande para encontrar varias plantas en esta 1:1. Es decir, que hemos creado laF1 que contiene condición. todos los alelos deseados (que no es poca cosa, como vemos en el análisis de la selección Lo sorprendente es que con un solo ciclo de gamética), y que ya estamos confrontando el reto selección negativa (que por cierto ha eliminado de como seleccionar dentro de la población 94% de la población) la probabilidad de segregar segregante. Si avanzáramos la población por lineas con los 10 genes en generaciones avanzadas Descendencia de Semillas Unicas, necesitaríamos ya es mucho mayor, 0.016 en vez de 0.001 sin una población de 1,024 para encontrar solo una selección. Si aplicamos otro ciclo de selección por línea con los 10 genes. Cómo podemos mejorar SAM, vemos todavía más efecto. Ahora 0.175 de esta proporción? Observemos la Tabla 3 donde la población es AA ó Aa en los 10 loci, y la población están representadas las cifras de unos datos segregará más que 10% de las lineas con todos simulados. Esencialmente, el objetivo es mantener los 10 genes en generaciones avanzadas! los individuos en la población que tienen la Falta probar este sistema de selección negativa posibilidad de segregar el genotipo con todos los para aumentar la frecuencia de los genes favora­ genes deseados. Esto implica guardar tanto los bles en la población, sin embargo, esta podría ser genotipos homocigóticos para el alelo deseado una de las aplicaciones más efectivas de SAM en (AA) como los heterocigóticos (Aa) pero en todos términos de costos y eficiencia. Esto podría ser un 10 loci. servicio importante del CIAT a los programas nacionales, el de proveer poblaciones ya pre­ En el F2 con referencia a cada locus, hay 0.75 seleccionadas para genes claves. Tabla 3: Selección negativa con marcadores contra el homocigoto aa en 10 loci y en tres generaciones: efectos en las frecuencias de alelos en cada generación y en la proporción de lineas avanzadas con los 10 genes deseados. Proporción Proporción líneas segregando con de población Frecuencias Segregación 10 genes deseados en generaciones que es AA ó Aa de alelos Generación en cada locus avanzadaspara 10 loci Sin SAM Con SAM Sin SAM Con SAM F2 1AA:2Aa:1aa 1(.75)1° = 0.50 A: 0.66 A: (,50)10 = (,66)10 = 0.056 0.50 a 0.33 a 0.001 0.016 F3 3AA:2Aa:1aa (,84)10 = 0.66A: 0.80 A: (.66)10 = (.80)10 = 0.175 0.33a 0.20 a 0.016 0.107 F4 7AA:2Aa:1aa (.90)10 = 0.80 A: 0.89 A: (,80)10 = (89)10 = 0.349 0.20 a 0.11a 0.107 0.312 VERACRUZ, MEXICO. Enero 1,998 138 Steve Beebe y Fabio Pedraza LOS PROXIMOS PASOS y con seguridad en los resultados. El Dr Norman Weeden de la Universidad de Corneli A la luz de la situación de tener disponible un está colaborando con nosotros en este sentido. número creciente de marcadores para genes de interés para Centroamerica, y con algunos concep­ 4. Mapeo de los genes de caracteres útiles con tos de como implementarios, cuales son los referencia a uno de los mapas establecidos: próximos pasos en el desarrollo y uso de los Este paso facilita el reconocimiento de liga­ marcadores? Podemos señalar 4 puntos que aún mientos entre genes y así predecir si se pueden requieren atención. recombinar tos genes con mayor o menor facilidad. Hasta ahora la mayoría de los 1. Caracterizar los genes: Para tener confianza marcadores mapeados no están relacionados que un gen vale el esfuerzo para seleccionarlo con caracteres útiles, y la mayoría de los dentro de un plan de SAM, hay que saber su marcadores de genes útiles no están mapea­ verdadero valor. En el caso de un gen de dos. Sin embargo, hay avances importantes resistencia, por ejemplo, esto implica saber el en unir los varios mapas de marcadores (Freyre rango de cepas por las cuales un gen es et al, en preparación) y este es un paso impor­ efectivo. Para la sequía, sería útil saber cuales tante para mapear eventualmente tos genes genes sirven para que tipo de ambiente o útiles. También, existe un base de datos de patrón de sequía. Así que se requiere el apoyo marcadores mapeados que es accesible por de otros disciplinas en el trabajo de caracterizar internet en o Varios mapas están 2. Poner prioridades para los genes a incluir en disponibles en