Lectins of Erythrina poeppigiana and Erythrina steyermarkii (Leguminosae): charaderization and mitogenic effect
artículo original
Autor
Quesada Mora, Silvia
Nanne Echandi, Clara Isabel
González, Luis
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Erythrina species are widely distributed in Costa Rica and known popularly as "poró". In this study, two species were selected, Erythrina poeppigiana and Erythrina sreyermarldi. Seed extracts were prepared in phosphate-buffered saline. The presence of lectins in the extracts was verified by hemagglutinating effect over suspensions of human erythrocytes. A selective hemagglutinating effect on erythrocytes of severa! marnmal species, goat, horse and rabbit red cells was tested; only the latler were agglutinated by E. sreyermarkii. The hemagglutinating effect of both lectins was inhibited with the following carbohydrates: D-galactose, N-acetyl galactosamine, D-Iactose and D-raffinose. The lectin from E. sreyermarkii was also inhibited with L-rhamnose. Both lectins were isolated with gel filtration and affinity chrornatography using lactose as ligand. Fractions that proved positive were tested with the sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis (SDS-PAGE). Gel filtration and SDS-PAGE showed that these lectins have an apparent molecular mass of 50kDa, and are formed by two subunits of approximately 25 kDa. E. poeppigiana had no mitogenic effect, but the extraet of E. steyermarkíi had a mitogenic effect on human mononucJeat cells isolated from peripheral blood. The stability of the lectins was tested at different temperature and pH ranges (4 to 100 oC) and at pH 2 to 12. 80th were stable al a pH range: from 2 to 10, and at temperatures from 40 to 70 oC. Las diferentes especies de Erythrina se encuentran ampliamente distribuidas en Costa Rica y se las conoce popularmente con el nombre de "poró". En el presente estudio, se seleccionaron dos especies: Erythrina poeppigiana y Erythrina steyermarkii. Se prepararon extractos de las semillas en solución tampón salina de fosfatos y se verificó la presencia de lectinas en ellos mediante la técnica de hemaglutinación, utilizando eritrocitos humanos. Se trató de demostrar un efecto selectivo de la hemaglutinación empleando eritrocitos de varias especies de mamíferos, específicamente de carnero, caballo y conejo. Solo los eritrocitos de conejo fueron aglutinados con la lectina de E. steyermarkii. El efecto hemaglutinante de las dos lectinas fue inhibido con los siguientes carbohidratos: D-galactosa, N-D-acetil galactosamina, D-Iactosa y Drafinosa. La lectina de E. steyermarkii también fue inhibida con L-rhamnosa. Las dos lectinas fueron aisladas por filtración en gel y cromatografia de afinidad, usando lactosa como ligando. Las fracciones que resultaron positivas se analizaron mediante la técnica de electroforesis en gel de poliacrilamida y duodecil sulfato de sodio (SDSPAGE). Con la filtración en gel y el SDS-PAGE, se comprobó que las dos lectinas tienen una masa molecular aparente de 50 kDa y. que están formadas por dos subunidades de 25 kDa, aproximadamente. Se buscó un efecto mitogénico en las dos lectÍnas y se encontró que sólo E. steyermarkii lo manifestaba sobre células mononucleares humanas aisladas de sangre periférica. Se determinó la estabilidad de las ¡eetinas en diferentes ámbitos de temperatura (4 a 100°C) y de pH (2 a 12 ). Las dos lectinas se mantuvieron estables en un rango de temperatura de 40 a 70°C y en un pH de 2 a 10.
Colecciones
- Revista de Biología Tropical [2107]